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第一章 绪 论第一节 基因工程诞生的理论基础 一.确定了遗传信息的携带者是DNA而不是蛋白质。明确了遗传的物质基础问题 1. 肺炎双球菌转化实验1944年 Avery，确定了基因的分子载体是DNA，而不是蛋白质。 2. 噬菌体转染实验1952年Alfred Hershy和Marsha Chase进一步证明遗传物质是DNA二.揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理，解决了基因的自我复制和传递的问题。 1953年James D. Watson和Francis H. C. Crick揭示了DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机制。三.提出了“中心法则”和操纵子学说，并成功地破译了遗传密码，从而阐明了遗传信息的流向和表达问题 1958年Crick又提出了遗传信息传递的“中心法则” 1964年Marshall Nirenberg和Gobind Khorana等终于破译了64个遗传密码 F.Jacob和J.Monod在1961年提出了操纵子学说第二节 基因工程诞生的技术基础 DNA分子的体外切割与连接 1.限制性内切酶（restriction enzymes） Werner Arber 理论预见限制酶 1968年H.O. Smith等分离出第一种限制性核酸内切酶 Daniel Nathans 用限制酶切得SV40 DNA片断 3人于1978年获得Nobel生理或医学奖2. DNA连接酶（ligase） 1967年5个实验室几乎同时发现了DNA连接酶二. DNA分子的核苷酸序列分析 1975年F. Sanger、A. Maxam和W. Gilbert发明了DNA快速测序技术, 1980年Nobel化学奖三.载体的构建 1972年前后使用小分子量的细菌质粒和?噬菌体作载体。在细菌细胞里的大量扩增四.转化技术 1970年M. Mandel和A. Higa发现经过氯化钙处理的大肠杆菌容易吸收噬菌体DNA。1972年S. Cohen发现这种处理过的细菌同样能吸收质粒DNA五.琼脂糖凝胶电泳和southern转移杂交技术 1960s发明了琼脂糖凝胶电泳，可将不同长度的DNA分离开;DNA印迹技术由Southern于1975创建,称为Southern印迹技术 第三节 基因工程发展史上的某些重要事件1869年，F.Miescher首次从莱茵河鲑鱼精子中分离到DNA 1944年，O.T.Avery等人在肺炎链球菌转化实验中发现遗传信息的携带者是DNA，而不是蛋白质 1952年， A.D. Hershey和M.Chase 再次证明T2噬菌体的遗传物质是DNA 1953年，J.D.Watson和F.H.C.Crick 提出双螺旋结构模型 1958年, Meselson米西尔森和Stanl斯坦尔提出了DNA半保留复制模型 1961年，马太(Matthaei)和尼伦伯格(Nirenberg)破译了第一批密码子， F.Jacob和J.Monod提出了操纵子模型 1962年，Arber等人发现限制性内切酶1968年, Smith和wilcox在流感嗜血杆菌中分离并纯化了限制性内切酶Hind III 1967-1968年，发现了DNA连接酶，建立了DNA序列分析方法 1972年，得到了第一个重组的DNA分子 1973年，完成了第一个细菌基因的克隆 1974年，首次实现了异源真核生物的基因在大肠杆菌中的转化 1978年，用大肠杆菌表达人工合成的人脑激素和人胰岛素 1981年，成功获得了第一个转基因小鼠，培育出转基因果蝇 1982年，第一个由基因工程菌生产的药物:胰岛素 1983年，第一个转基因植物培育成功 1986年，基因工程生物在控制的情况下，实验性地释放到环境中 1988年，开始人类基因计划 1994年，基因工程西红柿在美国上市 2000年，人和拟南芥测序完成 2006年， 水稻基因组测序完成第四节 基因工程的定义及其主要的研究内容 一.基因工程的诞生1. Berg的开创性实验 1972年斯坦福大学的Paul Berg小组完成了首次体外重组实验：将SV40的DNA片断与?噬菌体的DNA片断连接起来(用DNA末端转移酶，而非限制性内切酶)。2. Boyer-Cohen实验1973年斯坦福大学的S. Cohen小组将含有卡那霉素抗性基因的大肠杆菌R6-5质粒与含有四环素抗性基因的另一种大肠杆菌质粒pSC101连接成重组质粒，具有双重抗药性。后来又把非洲爪蟾核糖体基因片断同pSC101质粒重组，转化大肠杆菌，并在菌体内成功转录出相应的mRNA。这是第一次成功的基因克隆实验。Boyer-Cohen实验Herb BoyerStanley Cohen1986 Nobel生理或医学奖二.基因工程的定义和特征定义 在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，