基因工程的概念.pptx

Chapter 15 Recombinant DNA and Genetic Engineering;基础理论和技术的发展催生了基因工程;;;;15.1 基因工程的概念;基因工程(gene engineering)常和以下名称混用;二、基因工程的主要内容或（步骤）;三、基因工程的应用;15.1 基因工程的概念;转基因植物;转基因动物作为生物发生器;15.2 基因工程中的工具酶;15.2 基因工程中的工具酶; 一、限制性内切酶;一种限制酶只能识别一种特定核苷酸序列；并在特定切点切割．;（一）、限制修饰系统的种类;（二）、限制性内切酶的定义、命名;（三）、限制酶的特点; 2.??末端种类 １）３’-端突起，个数为２或４个核苷酸 Pst I 5’-CTGCAG-3’ 5’-CTGCA G-3’ 3’-GACGTC-5’ 3’-G ACGTC-5’ ２）５’-端突起，个数为２或４个核苷酸 EcoRI 5’-GAATTC-3’ 5’-GOH PAATTC-3’ 3’-CTTAAG-5’ 3’-CTTAAP HOG-5’ 粘性末端能与另一个相同的粘连末端相连接，任何两个具有相同识别 位点的DNA分子经限制酶切割后能够重新连接成新的重组DNA分子。在进行 DNA重组时，应用限制酶同时切割目的基因和载体DNA，使之产生相对的粘 性末端，然后再将二者连接成重组DNA分子; EcoR Ⅰ 5’- G-A-A-T-T-C-3’ 3’- C-T-T-A-A-G-5’ ;SmaI 5’-CCCGGG-3’ 5’-CCC GGG-3’ 3’-GGGCCC-5’ 3’-GGG CCC-5’; ３）?平齐末端 SmaI 5’-CCCGGG-3’ 5’-CCC GGG-3’ 3’-GGGCCC-5’ 3’-GGG CCC-5’ ４）非互补的粘性末端 ａ）切点在识别顺序之外的，如：FokI Fok I 5’-GGATG(Ｎ)9-3’ 5’-GGATG(N)9 3’-CCTAC(Ｎ)13-5’ 3’-CCTAC(N)13 ｂ）能识别简并顺序的，如：AvaI AvaI 5’-CPyCGPuG-3’ CCCGGG; CTCGGG; CCCGAG; CTCGAG ;（四）、异源同序酶（isoschizomer，同裂酶）;（五）、 限制酶的用途;Restriction Maps (a);Restriction Maps (b);;二、DNA聚合酶; 3. 用途 1） 除去3’-端突起的单链DNA（在无dNTP时） 2） 补齐5’-突起端 3） 合成第二条cDNA 4） 切口移位制备探针 其中用途2) 和3)常用大片段;三、连接酶;5’-AAGCTT-3’ 5’-AOH PAGCTT-3’ PAGCTT AOH 3’-TTCGAA-5’ 3’-TTCGAP HOA-5’ HOA TTCGAP 退火 5’-AHOPAGCT T AHOPAGCT T-3’ 3’-T TCGAPOHA T TCGAPOHA-5’