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临床实验室质谱检测原理简介 临床实验室质谱(mass spectrometry, MS )技术在临床实验室中的应用随 着MS分析仪的创新不断拓展。最早的MS分析仪采用扇形电场及磁场实现 质量分离，体积大、价格贵。随着四极杆MS分析仪与色谱分离、第1代气 木目色谱(gas chromatography, GC )及液木目色谱(liquid chromatography, LC)技术的联用，大大提升了 MS技术的实用性。三重四极杆等多重MS技 术的联用与LC分离技术令检测向高敏、可重复、定量方向发展，这是目前临 床实验室开展MS检测的基础⑴。随着MS分析仪的不断发展及轨道阱 (Orbitrap ) MS分析仪的诞生,LC-MS的联用更是如虎添翼。 采用GC/MS对类固醇［2］及有机酸［3］进行检测是MS技术最先在临床实验室 应用的项目。继串联MS检测酰基肉碱诊断新生儿遗传代谢病(inborn error of metabolism, IEM 其在临床检测中的应用开始加速［4］。LC-MS联用 尤其是与串联四极杆MS联用时，能实现对小分子药物及其代谢产物的量化 检测，促进了该领域仪器研发的进步［5］。治疗药物监测与毒理学的迅速发展 在提升仪器灵敏度及实用性的同时，进一步扩大了 MS技术的应用范围［6］。 1仪器 1.1 MS分析仪类型 MS分析仪可对单个分子或分子片段进行质量分析，要求被分析对象带电荷 并呈气相，一般由紧密相连的离子源、质量分析器及检测器3个部分组成。 离子源外接样品弓I入系统，是离子生成的部位；多数MS分析仪的质量分析 器根据离子质荷比(mass-to-charge ratio, m/z )区分离子；检测器将离子 分别转换成信号并传入仪器数据处理系统，由数据处理系统控制整个仪器。 MS技术具有较高的特异性，尤其在与可重复色谱分离技术联用时，其检测结 果可作为许多临床检测的金标准。也就是说，该技术可作为其他特定分子 浓度检测手段的校准方法。仅当某方法被作为参考方法且检测严格按照书面 程序进行时，可将液相色谱串联质谱(liquid chromatography tan dem-mass spectrometry, LC-MS/MS )作为全标准。但由于 MS 分析仪系统复杂、维持具精密度以获得准确的结果亦具有一定难度,MS技术 常被视作无其他方法可用时的最佳技术。 MS分析仪根据m/z［离子质量(相对原子质量)m电荷数］分析被测物的质 量。例如,25-轻基维生素D3的相对原子质量为400,当加入1个质子 ［(400+1 )个质子］而带单电荷时，可在m/ z为401处被检测到；当加入2 个质子而带双电荷时［(400+2 )个质子,402/2 = 201］,可在m/z为201处 被检测到。通常以m/z衡量准确度，检测越准确则分子式鉴定能力越强。仍 以25-轻基维生素D3为例，其分子式为C27H44O2,分子离子经质子化后的 相对原子质量为401 (加入1个质子形成C27H45O2 ),具精确质量保留至 5位小数，为401.341 97。尽管经质子化的C27H45O2( 25-轻基维生素D3, m/z 为 401.341 97 )与 C28H49O (菜油角醇,m/z 为 401.370 52 )之间的 质量差异仅为0.028 55,但MS技术仍可通过m/z精确区分两者。检测误差 决定了质量检测结果所对应的潜在分子式的数量。高分辨质谱仪(high resolution mass spectrometer, HRMS )能精确离子 m/z。 整体准确性及有效位数层面的质量检测能力是区分不同类型MS分析仪的标 准之一。为提升整体准确性,MS分析仪常采用四极杆作为质量过滤器。四极 杆由4根杆组成，以相对的2根杆为1组，通过在2组杆上施加相抵消的直 流电高频电压来实现质量过滤。许多MS分析仪都可提供准确的质量信息，如 检测加速离子飞行时间的飞行时间(time of flight, TOF ) MS分析仪 ⑺8］, 检测捕获离子振荡频率的分析仪——利用磁场捕获离子的傅里叶变换质谱 分析仪(Fourier transform mass spectrometer, FTMS )与通过经典吸引 平衡离子惯性进行捕获的轨道阱MS分析仪［9, 10, 11］。 多重MS技术的联用令MS分析仪能够在离子水平上同时进行多项临床实验。 由3个紧密联系的四极杆分析仪组成的三重四极杆较为常用，其常见的工作 模式见图1 ［12］。最简单的模式是全扫描，在质量分析器设定的扫描范围内采 集生成的全部离子的信号,Q1与Q3同时进行扫描,Q2设置为所有离子可通 过、不含碰撞气体，见图1 ( a );产物离子扫描可对不同质量的分子进行定 量检测,Q1设置为仅特定m/