第六章DNA重组与克隆final.pptxVIP

　;DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合称遗传重组或或基因重排。 重组产物称为重组体。 基因重组主要发生在减数分裂时同源染色体之间的交换。（形式多样） 重组与进化关系密切，增加群体的遗传多样性，利于突变的优化组合。 ;DNA重组;发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologous recombination)，又称基本重组。是最基本的DNA重组方式，通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。 ;Holliday模型中，同源重组主要4个关键步骤 ;片段重组体 ： 切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA。; 内切酶 (recBCD);片段重组体 （见模型图左边产物）： 切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA。;5′;Holiday中间体;;同源重组是减数分裂的原因。 同源重组是由于碱基间的精确配对实现的;异源双链与基因交换;Holliday 模型提出了同源重组的基本模式，但对于基因重组具体细节，异源双链的形成细节不清楚。 在Holliday基础上提出了单链断裂模型和双链断裂模型，两个模型的区别在于解释重组期间DNA的修复的具体过程不一样。有供体受体之分。（受体：发生链断裂的分子P138-139）;细菌的基因转移与重组;　;　;　;　;例：溶菌时，裂解的DNA片段被另一细菌摄取。;　;溶 菌;转导：当病毒从被感染的供体细胞释放出来，再次感染另一受体细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用;*转染(transfection);细菌的细胞融合;细菌的同源重组的酶学机制;3‘;e、 RecBCD 切割产生3’单链末端; 2、RecA 蛋白;RecA;RecA引起的链交换和Holliday结构的生成 ; （2）RecA 蛋白催化双链和单链 DNA 的反应阶段;? RecBCD 和 RecA 的共同作用; 3、原核同源重组的其它蛋白;? E.coli 重组的各阶段 （损伤修复）;7.2、位点专一性重组（ site-specific recombination）;二、λphage的整合与切除（溶原和裂解状态）;3、整合过程;溶源性细菌 (lysogen);4、整合分子机制;int;? 整合体及其作用 整合体（intasome）--- Int和IHF结合到attP时的复合物;? Int蛋白能切断DNA，并使它重新连接，近而使holliday结构拆分;例（二）细菌的特异位点重组;hix为反向重复序列，它们之间的H片段可在Hin控制下进行特异位点重组(倒位)。H片段上有两个启动子P，其一驱动hin基因表达，另一正向时驱动H2和rH1基因表达，反向(倒位)时H2和rH1不表达。rH1为H1的阻遏蛋白基因。; H2鞭毛素;7.3、转座成分概述;a) 不依赖供体序列与靶位点间序列的同源性;二、Prok.转座子种类;? 特点： a）两端IR为转座酶的识别位点（突变） b）插入靶位点后会出现靶位点的正向重复（3～9bp）;? IS 可以正反方向插入到DNA（宿主、质粒或某些噬菌体）， 常对插入位点后面的基因表达功能产生极性效应;a) Tn / TnA family ; b）两端重复序列为IS的复合转座子;? 当两个IS组件相同时，其中任一个都可行使转座功能;3 转座噬菌体 Mu phage （巨型转座子 ） ;? Mu的插入途径;三、转座子的转作机制及模式;? 两大步; b) 拆分;2、非复制型转座模式;五、转座子的某些遗传学效应－－P157 转座可以导致基因变异 插入操纵子位置可以影响操纵子下游基因表达 应用： 难以筛选的基因转移 基因定位标记 筛选插入突变 构建特殊菌株 克隆难以进行表型鉴定的基因 ;7.3.6 真核生物的转座成分P152自学; 真核生物的转座成分根据转座机制目前分为两类：;第 二 节 重组DNA技术;重组DNA技术的发展史;;一、重组DNA技术相关概念 ;DNA克隆 应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。;生物技术工程: 基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等。;（二）工具酶;重组DNA技术中常用的工具酶;限制性核酸内切酶;作用： 与甲基