微生物吸光值法定量检测实验.pdfVIP

微生物吸光值法定量检测实验 通过对铀矿冶生物技术国防重点学科实验室提供的巴氏芽孢杆菌的培养，分 别取相同菌量 1ml 菌悬液（OD600=1.0440 ），按相应体积倍数稀释后，测定各 OD600 值。数据的拟合发现，全部稀释倍数乘幂关系拟合线拟合度不高，OD600 值大于 1 或小于0.2 时，越靠近坐标轴，数据越失真，误差越大。截取0.2～1.0 之间的OD600 值，拟合乘幂曲线为y=1.0764x-1.0115 （R2=0.9976 ），应用简单 数关系y=1.044/x 换算，两者误差都维持在5%之内。OD600 值在0.2～1.0 之间 运用简单倍数关系换算准确、快捷。 标签：菌量；快捷；最优区间；倍数关系 1 引言 微生物在人类生产生活中体现的特殊优势早已出现，如污水治理中重金属离 子的细菌吸附[1]、矿业工程的生物浸出[2]、岩土工程的生物固化[3-4]等等，微 生物已成为国内外研究的热点。 在研究微生物的过程中，对微生物量的测定是必须的一个过程。测定微生物 生长的方法很多，可分为直接法和间接法两大类。直接法有粗放的测体积法 （在 刻度离心管中测沉降值）和精确的称干重法。间接法有比浊法和生理指标法[5]。 比浊法是实验室中经常使用的一种方法，用分光光度计选定一定波长（450nm～ 650nm ），对微生物悬浮液进行吸光度的测定[6]。比浊法适用范围广，测量值在 一定的区间内比较准确、可靠[7]。 采用比浊法测定的OD 值，与细菌的浓度在一定范围内是呈现着正比例的关 系[8]。实验室中经常会遇到菌悬液稀释的问题，稀释后的菌悬液 OD 值和初始 的悬液 OD 值的关系却也不是简单的倍数关系，而是呈现出一种乘幂关系[9]。 较高的初始OD 值需要稀释且较低的OD 值需浓缩后才能用于测定，而不能直接 测定以防止检测结果的不准确性，出现较大的误差甚至是错误[10]。 为此，准确测定细菌菌液浓度，了解在一定OD 值范围内，稀释倍数与稀释 OD 值的关系及准确快速进行菌量比较的方法在对实验数据的相关换算方面有着 一定的意义。 2 材料和方法 2.1 仪器设备 AL 104 电子天平、VB-40 高压灭菌锅（德国systec）、SW-CJ-1FD 洁净工作 台、小容量恒温高速培养振荡器摇床（ SHP-200D ）、微量冷冻离心机（5415R Germany ）、蛋白核酸测定仪（biophotometer eppendorf Germany ）、pHS-3C 酸度 计、eppendorf 移液枪