微生物学实验报告.pdfVIP

WORD 格式--可编辑--专业资料 2012 级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜 学号: 2012304090 班级: 制药12-2 班 指导老师：王健 日期：2014.6.11 --完整版学习资料分享 WORD 格式--可编辑--专业资料 一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain 染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 ˉ ˉ + + 1.1 实验原理：染色原理：G 菌 G 菌细胞壁不同，G 菌比G 菌细胞内核糖核酸镁盐含量高， ˉ + G 菌比G 等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许， 2 与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm 大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲 洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 1.3 实验结果 图1：Gram’s stain （1000 ×） 图2 ：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平 板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有 时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样 品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。 --完整版学习资料分享 WORD格式--可编辑--专业资料 2实验步骤 2.1示教：观察普通平板、麦康凯平板、血平板、四区分离划线平板，手机摄像。 2.2 分离划线培养： 预实验：以灭菌接种环与普通平板背面做四区分离划线； 正式试验：○1 以灭菌接种环取细菌少许，在普通平板上划线，划线区域约占整个平板的 1/10~1/5,划线间不能有交叉现象； ○2 以灭菌接种环自第一区 2~3 个交叉，然后依次分离划线，约占整个区域的 1/3~1/4； ○3依上法进行3、4 区分离划线； ○4倒置平皿置37℃温箱培养24h，观察记录实验结果，手机摄像。 3 实验结果 图1：培养前 图2：培养后 四、细菌初步生化反应： 1实验原理：具有的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。 2实验步骤 2.1色素试验：取滤纸条，两次对折，以折角小心取菌落少许，小心展开，观察记录，手机拍照； 2.2 氧化酶试验：取上述含菌滤纸条，滴加氧化酶试剂一滴，观察记录，手机拍照； 2.3 触酶试验：以灭菌接种环取细菌少许，置一洁净玻片表面，另设NS对照，各加一滴新制的 3%H