第十单元免疫缺陷性疾病的免疫学检测.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 注意事项 用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂 K2EDTA、K3EDTA、酸性枸橼酸葡萄糖溶液（ACD）或肝素抗凝 一般要求48h内染色，染色后6h内分析。如采血后24h内染色，则可在染色后24h内分析。 在室温（18～25℃）保存和运输样品，避免极端温度（结冰或大于37℃）。高温季节，需用隔热容器盛装样品，并将其置于有冰袋和吸热物质的容器中。 溶血、凝血或结冰的样品应视为不合格样品，超过检测允许时间的样品不可检测。 应报告所有相关数据的正常值范围，且每个实验室都应测定参考数值。 第三十一页，编辑于星期五：十九点 九分。 临床意义 ①用于HIV感染者的疾病分期： 凡CD4+T淋巴细胞＜200/μl或CD4+T淋巴细胞的百分比＜14%的HIV感染者可归入艾滋病。 ②判断HIV感染的临床合并症：如CD4+T淋巴细胞＜200/μl时，易发生卡氏肺囊虫肺炎；而巨细胞病毒感染和鸟分支杆菌感染常发生于CD4+T淋巴细胞＜50/μl的病人，极少见于CD4+T淋巴细胞＞100/μl的病人。 第三十二页，编辑于星期五：十九点 九分。 思考题 T淋巴细胞的流式细胞检测技术包括多平台法和单平台法，试述两种方法的差异？ 第三军医大学 吴 超 第三十三页，编辑于星期五：十九点 九分。 临床见习： HIV抗体初筛试验 第三十四页，编辑于星期五：十九点 九分。 了解HIV抗体初筛试验的实验室要求和检测流程与质量控制，熟悉用于HIV抗体初筛试验的样品种类与采集要求，掌握HIV抗体初筛试验中ELISA检测方法原理与结果分析。 见习要点 第三十五页，编辑于星期五：十九点 九分。 采用双抗原夹心ELISA法检测血清中HIV（1+2）抗体。HIV抗原包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，洗涤，加底物显色。通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。 基本原理 第三十六页，编辑于星期五：十九点 九分。 样品的采集与要求 HIV抗体初筛试验可采用血清、血浆样品。 1．采样前准备 根据检测项目的具体要求，确定采集样品的种类、处理、保存及运输的时限和方法，按照临床采血技术规范的要求操作，遵守生物安全要求。 检查所需物品是否已备齐，是否在有效期内，有无破损，是否足量，特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否一致，并注明样品采集时间。选择合适的室内（外）采血空间，受检者坐（卧）于合适的位置，准备采血用具、皮肤消毒用品、采血管及试管架、硬质废弃物容器等。 第三十七页，编辑于星期五：十九点 九分。 2．采集和处理样品 ①血浆：将采集的抗凝全血1500～3000r/min离心15min，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。 ②血清：根据需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5～10ml静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用1500～3000r/min离心15min，吸出血清，置于合适的容器中，备用。 第三十八页，编辑于星期五：十九点 九分。 3．样品的保存 用于HIV抗体检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃， 一周以上应存放于-20℃以下。艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室，而筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存1～2个月。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。 第三十九页，编辑于星期五：十九点 九分。 4．样品的运送 根据符合生物安全要求；要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。应采用三层容器对样品进行包装，随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。送检单应标明受检者姓名、样品种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。 第四十页，编辑于星期五：十九点 九分。 1．初筛试验 根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。 筛查程序 第四十一页，编辑于星期五：十九点 九分。 2．复检试验 对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如两种试剂复检均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确证实验室进行确证试验（图