缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注血脑屏障的保护作用及Occludin蛋白表达的影响.ppt

缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注血脑屏障的保护作用及Occludin蛋白表达的影响 * ppt课件 一、立题依据： 缺血性脑卒中是临床常见病和多发病； 目前临床已开展溶栓和动脉介入治疗，使闭塞的脑动脉再通； 血管再通后再灌注会加重组织细胞功能代谢障碍及结构破坏，即再灌注损伤； 如何寻找有效的方法减轻再灌注损伤是临床上的难题。  * ppt课件 精品资料 你怎么称呼老师？ 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？ 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭 “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……” “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……” 一、立题依据： 血脑屏障受损是脑缺血再灌注损伤的重要的病理生理的因素。 寻找有效的血脑屏障保护方法是临床上急待解决的问题。 ①脑毛细血管内皮细胞及紧密连接 血脑屏障结构 ②基底膜 ③星形胶质细胞足突 * ppt课件 血脑屏障结构 * ppt课件 一、立题依据 紧密连接是保持血脑屏障完整性的重要因素 （1）跨膜蛋白( Claudin、Occludin、JAM) （2）膜相关蛋白( ZO、扣带蛋白、AF-6、7H6) 其中，Occludin是紧密连接的主要结构蛋白，是血脑屏障低通透性明显低的重要原因。Occludin 表达水平能够代表BBB 的结构状态, 其下降程度可以作为BBB 损伤程度的标志。  * ppt课件 紧密连接 * ppt课件 一、立题依据 脑缺血后处理是指在脑缺血后再灌注之前对缺血脑组织进行反复、短暂性缺血再灌注，使脑组织对前面较长时间的缺血产生耐受性，减轻再灌注损伤。 是一种有效的内源性保护机制。 脑缺血后处理发生在缺血事件后,具有可控性,因此具有较大的临床价值。 * ppt课件 缺血后处理 2006年zhao发现后处理具有神经保护作用 其神经保护作用目前机制尚不完全清楚，可能机制有影响了脑血流量，进而影响自由基的产生，包括炎症、凋亡等途径，线粒体渗透性转化孔，等 既然对神经元具有保护作用，那么在缺血后处理对缺血再灌注后的BBB是否具有保护作用呢？ * ppt课件 二、研究对象 选自中国医科大学附属盛京医院 实验动物部280-320g 雄性Wistar大鼠 * ppt课件 三、研究目标： 1、观察大鼠脑缺血后处理对血脑屏障的 保护作用。 2、检测大鼠脑缺血再灌注组与脑缺血后处理组紧密连接中跨膜蛋白Occludin的表达。 * ppt课件 五、技术路线 Wistar大鼠 梗死体积 TTC染色 TJ蛋白（Occludin）表达与分布变化 免疫组化， Western Blot 假手术组 缺血再灌注组 缺血后处理组 BBB通透性 脑水肿 结构变化 神经功能 伊文思蓝法 干湿重法 电 镜 神经功能评分 血脑屏障 后处理 * ppt课件 五、研究内容 1. 建立大鼠局灶脑缺血模型 2.神经功能评分 3.TTC染色计算脑梗塞体积 4.干湿重法判断脑水肿情况 5.伊文思蓝通透法评估血脑屏障通透性 5.1甲酰胺法 5.2荧光显微镜法 6.电镜观察血脑屏障紧密连接结构 7. 检测Occludin表达——免疫组化方法 8. 检测Occludin表达——Western Blot方法 * ppt课件 六、研究方法1. 实验动物分组及处理方法 实验动物分为假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组。 （1）假手术组：n=6只 （2）缺血再灌注组：n=6只，缺血2h，再灌 注24h （3）缺血后处理组：n=6只，给予缺血后处理：缺血2h后，给予再灌注30s，缺血30s，3个循环，之后再灌注24h。 * ppt课件 操作模拟图示 * ppt课件 2. 大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO) 麻醉 固定 颈正中切口 暴露结扎血管 近分叉处剪口 插入线栓 固定 2h后再灌 * ppt课件 3.神经行为学检查 ——神经功能评分 参照Zea Longa5分制评分标准法。 0分：无神经损伤症状； 1分：对侧前爪不能完全伸直； 2分：行走时向对侧转圈； 3分；站立不稳，向对侧倾倒； 4分：不能自发行走；意识丧失。 术后约1h动物可苏醒及术后24h后，观察神经功能缺失情况。累计1分以上即为成功模型。  * ppt课件 4.TTC染色 计算公式： 梗死体积百分率=（正常侧大脑半球体积-梗塞侧非梗塞区脑组织体积）/正常侧大脑半球体积×100% 断头取脑 切片 避光下染色 计算梗死体积 * ppt