实验一蛋白质变性凝固及沉淀.ppt

实验一蛋白质变性凝固及沉淀 第一页 实验目的 能够说出蛋白质变性、凝固反应的原理及实验方法 能够说出蛋白质沉淀反应的原理及实验方法 能够运用盐析法及重金属沉淀法 第二页 主要实验内容 蛋白质的加热变性凝固 蛋白质沉淀反应 蛋白质盐析 重金属盐沉淀蛋白质 生物碱试剂沉淀蛋白质 第三页 蛋白质的变性 (denaturation) 在某些理化因素的作用下，蛋白质严格的空间结构被破坏（不包括肽键的断裂），从而引起若干理化性质和生物学性质改变的现象。 第四页 变性后的蛋白质称变性蛋白,能使蛋白质变性的物质叫蛋白质变性剂。 变性因素 物理因素 高温、高压 紫外线、X射线、 电离辐射和超声波等 化学因素 强酸、强碱 有机溶剂、重金属盐 高浓度尿素、盐酸胍等 变性实质： 破坏了空间结构，一级结构不受影响（分子组成、 分子量不变）。 第五页 变性的可逆性 可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构可以恢复原状。 不可逆变性：除去变性因素，蛋白质空间结构不能恢复原状。 利用 消灭病原微生物 蛋白质制剂的保存 保护体内蛋白质 避免 第六页 蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体。 原因 蛋白质的胶体性质及沉淀: 表面形成水化层 表面同种电荷的斥力 除去这两个因素，就会发生沉淀。蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称为沉淀。 + + + + + + + + 第七页 + + + + + + + + + + + + + + + + - - - - - - - - 蛋白质胶体颗粒的沉淀 带正电荷的蛋白质 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 酸 酸 碱 碱 脱水 脱水 脱水 不稳定的蛋白质颗粒 （沉淀） 带正电荷的蛋白质 （疏水胶体） 带负电荷的蛋白质 （疏水胶体） 碱 酸 （亲水胶体） （亲水胶体） （亲水胶体） - - - - - - - - 第八页 可逆沉淀 不可逆沉淀 结构和性质都不变 适当条件下可重新溶解 是分离和纯化的基本方法 结构和性质都发生变化 沉淀不再溶解于水 蛋白质的沉淀 第九页 蛋白质变性沉淀并凝聚成块状称为凝固。 不可逆变性状态 蛋白质的凝固 第十页 蛋白质变性、沉淀与凝固的关系 变性属于蛋白质本质的变化，沉淀和凝固属于一种现象 变性不一定沉淀，变性蛋白质只在等电点附近才沉淀 变性蛋白易于沉淀， 沉淀蛋白不一定变性 沉淀的变性蛋白质也不一定凝固 第十一页 蛋白质的加热变性凝固 蛋白质分子受热作用，分子空间结构变化，疏水基团暴露于分子表面，溶解度降低。 当蛋白质分子不带电荷（处于等电点条件下），则蛋白质发生聚集出现沉淀； 当蛋白质分子带电（处于非等电点条件下），则蛋白质因静电排斥作用而不出现沉淀； 第十二页 实验内容 取三只小玻璃试管，各加入10%蛋白质溶液10d，分别标记为1、2和3号管； 向1号管中加入：pH4.8缓冲液10d 。混匀，于酒精灯上缓慢加热至沸点，观察变化（ ）； 高温下，蛋白质发生不可逆的变性并凝固。 第十三页 向2号管中加入：H2O 8d, 0.1mol/L HCl 2d。混匀，于酒精灯上缓慢加热至沸点，观察变化（ ） 停止加热，向2号管中逐滴加入：0.1mol/L NaCO3 。摇匀后继续滴加，一旦出现絮状物即停止。 将2号管于酒精灯上加热，观察现象（ ） 冷却后，再加入： 0.1mol/L HCl 2d。观察现象（ ） 蛋白质变性不一定出现沉淀； 蛋白质变性后在特定条件下发生沉淀； 沉淀加热后发生不可逆变性并凝固。 第十四页