胶体金常用的生物材料.pptVIP

双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和标记抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab）或Fab片段作标记结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而可消除RF的干扰。 第三十页，共46页。 双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。 第三十一页，共46页。 间接法 间接法 间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体等）与标本中的目标抗体结合，形成复合物，再层析到检测区和相应的抗原结合，从而显色反应。 第三十二页，共46页。 本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。 间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一标记抗抗体建立检测相应抗体的方法。 标记抗体也可使用Protein A,因其能与各种动物血清的IgG反应，所以可用在间接法中进行检测。 第三十三页，共46页。 * * 胶体金常用的生物材料 第一页，共46页。 胶体金常用的生物材料种类 胶体金检测是一种免疫测定，免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。 胶体金常用的生物材料主要是指抗原和抗体。 第二页，共46页。 抗原 抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。在免疫测定中，抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。 抗原的反应性取决于抗原决定簇（antigenic determinant），或称为表位（epitope）。一个抗原分子可带有不同的决定簇。 第三页，共46页。 用于胶体金检测的抗原抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类 。 第四页，共46页。 天然抗原 天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等（例如AFP从脐带血或胎肝中提取）。 第五页，共46页。 重组抗原 重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以大肠杆菌或酵母菌为质粒体。 重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于胶体金，在反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。 第六页，共46页。 重组抗原的另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCV 胶体金中所用包被抗原大多为根据HCV的基因克隆表达而制备的重组抗原。 第七页，共46页。 合成抗原 合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。 多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由于分子量太小，往往难于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白质（BSA）等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。 第八页，共46页。 应用多肽抗原的另一注意点为他仅能检测与其相应的抗体。一种蛋白质抗原往往含有多个不同的能引起抗体产生的决定簇，因此在受检血清中的其他抗体就不能与该多肽抗原发生反应。 第九页，共46页。 另外，某些微生物发生变异时往往发生抗原结构变化，在这种情况下，用个别多肽抗原进行包被可引起其他抗体的漏检。 第十页，共46页。 抗体 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定有关的Ig主要为IgG和IgM。 第十一页，共46页。 IGg IGM IgM分子量约为900000，IgG分子量约为150000 第十二页，共46页。 机体被微生物感染后，先产生IgM抗体，然后产生IgG抗体。经过一段时间，IgM抗体量逐渐减少而消失，而IgG抗体可长期存在，在疾病痊愈后可持续数年之久。 IgM抗体一般为保护性抗体，具有免疫性。因此IgM抗体的测定，对某些传染病如甲型肝炎有较高的临床诊断价值。 第十三页，共46页。 抗体按制备过程和抗体性质可分为单克隆抗体和多克隆抗体。 单克隆抗体是通过单组细胞分泌出来的抗体，最终以小鼠腹水形式出现，经纯化，成为可使用的IGg类型的生物材料。 多克隆抗体是指有多组细胞分泌的抗体，一般为二抗，如羊抗鼠等。 第十四页，