细菌生长曲线的测定.pdfVIP

实验五 细菌生长曲线的测定 一、 实验目的 1、 了解细菌生长曲线特点及测定原理 2 、 学习用比浊法测定细菌的生长曲线 二、 实验原理 大多数细菌的繁殖速率很快， 在合适的条件下， 一定时期的大肠杆菌细胞每 20min 分裂 一次。 将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中， 在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期， 对 数期， 稳定期和衰亡期四个阶段。 以培养时间为横坐标， 以细菌数目的对数或生长速率为纵 坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。 不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线 不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。 测定微生物的数量有多种不同的方法， 可根据要求和实验室条件选用。 本实验采用比浊 法测定，由于在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度（ OD 值）成正 比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度， 并将所测的 OD 值与其 对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。 三、 实验材料 1、 菌种：大肠杆菌 2、 培养基： LB 液体培养基 / 牛肉膏蛋白胨液体培养基 3、 仪器和器具： 721 分光光度计，比色杯 (1cm) ，恒温摇床，无菌吸管 (5mL) ，大试管， 三角瓶 (250mL) 。 四、 实验流程 标记 →接种 →培养 →测定 五、 操作步骤 1、 标记：取 11 支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即 0， 1.5，3，4， 6，8 ， 10， 12， 14， 16 和 20h 。 2、 接种：分别用 5mL 无菌吸管吸取 2.5mL 大肠杆菌过夜培养液 (培养 10~12h)转入盛有 60 mL 液体培养基的三角瓶内，混合均匀后分别取 5mL 混合液加至上述标记的 11 支无菌大试管中。 3、 培养：将已接种的试管置摇床 37℃振荡培养 (振荡频率 200~250r/min) ，分别培养 0， 1.5，3，4 ，6 ，8，10，12 ，14，16 和 20h，将标有相应时间的试管取出，立即放 4 ℃ 贮存，最后一同比浊测定其光密度值。 4、 比浊测定： 用未接种的液体培养基作空白对照， 选用 600nm 波长进行光电比浊测定。 从早取出的培养液开始依次测定，对细胞密度大的培养液用液体培养基适当稀释后 测定，使其 OD 600 在 0.1~0.65 之内 (测定 OD 值前，将待测定的培养液振荡，使细 胞均匀分布 )。 六、 注意事项 1、 测定 OD 值时，要求从低浓度到高浓度测定。 2、 严格控制培养时间。 七、 实验结果 1、 将测定的 OD 值填入下表： 培养时间 /h 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20 OD 600 2 、 以上述表格中的时间为横坐标， OD600 值为纵坐标，绘制大肠杆菌的生长曲线。 八、 思考 1、 根据实验数据画出生长曲线，并说明细菌生长特征。 2 、 若同时用平板计数法测定，所绘出的生长曲线与用比浊法测定绘出的生长曲线有何 差异？为什么？ 3 、 次生代谢产物的大量积累在哪个时期？根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可 使次生代谢产物积累更多？