细胞传代培养的原理及操作步骤.pdfVIP

一．细胞传代培养的原理及操作步骤 （一）原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生 长，同时也将细胞数量扩大， 须进行传代再培养。 传代培养也是一种将细胞种保 存下去的方法。 同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。 悬浮型细胞直 接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 （二）细胞传代培养具体操作 1、细胞：贴壁细胞株 2、操作步骤 1）将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 2) 加入 0.5-1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3) 瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的 细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入 10ml 培养液终止消化。 观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。 一般室温消化时间约为 1-3 分钟。 4) 用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞 好橡皮塞，置 37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。