水产品中氯霉素的快速检测胶体金免疫层析法.pdfVIP

附件 5 水产品中氯霉素的快速检测 胶体金免疫层析法 （征求意见稿） 1 范围 本方法规定了水产品中氯霉素的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于水产品中氯霉素的快速测定。 2 原理 本方法的测定以竞争抑制免疫层析原理为基础。 样品中的氯霉素经有机试剂提取， 固相萃取 小柱净化， 浓缩复溶后， 氯霉素与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合， 抑制了抗体和微孔膜检 测线（ T 线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线颜色深浅比 较，对样品中氯霉素含量进行定性判定。 3 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 正己烷。 3.1.2 丙酮。 3.1.3 乙酸乙酯。 3.1.4 乙腈 3.1.5 磷酸二氢钠， NaH2PO4 2H· 2O 。 3.1.6 磷酸氢二钠， Na2HPO 4 ·12H2O 。 3.1.7 氯化钠 3.1.8 复溶液：称取 0.12g 磷酸二氢钠 (3.1.5)置于 100ml 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制 成溶液 A ；称取磷酸氢二钠 7.16g (3.1.6) 置于 100ml 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成溶 液 B 。取溶液 A 2.8ml 、溶液 B 7.2ml 、氯化钠 (3.1.7)0.85g ，用水溶解并稀释至 100ml ，得磷酸盐 缓冲液。 3.1.9 丙酮 -正己烷（ 1+9 ）：丙酮（ 3.1.2 ）、正己烷（ 3.1.1）按体积比 1：9 混匀。 3.1.10 丙酮 -正己烷（ 6+4）：丙酮（ 3.1.2 ）、正己烷（ 3.1.1 ）按体积比 6 ：4 混匀。 3.2 标准物质 氯霉素参考物质的中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分之式、相对分子质量见表 1，纯度 ≥98.6% 表 1 氯霉素参考物质中文名称、英文名称、 CAS 登录号、分子式、相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 氯霉素 chloramphenicol 56-75-7 C H CL N O 323.13 11 12 2 2 5 注：或等同可溯源物质。 1 3.3 标准溶液配制 3.3.1 氯霉素标准储备液（ 1 mg/mL ）：精密称取氯霉素标准品（ 3.2 ）适量，置于 10 mL 容量瓶 中，用乙腈（ 3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为 1 mg/mL 的氯霉素标准储备液。 4 ℃ 避光保存，有效期 6 个月。 3.3.2 氯霉素标准中间液 A （10 μg/mL）：精密量取氯霉素标准储备液 （1 mg/mL ）（3.3.1 ）0.1 mL ， 置于 10 mL 容量瓶中，用乙腈（ 3.1.4 ）稀释至刻度，摇匀，制成 10 μg/mL 的氯霉素标准中间液 A 。4 ℃避光保存，有效期 3 个月。 3.3.3 氯霉素标准工作液 （0.01 g/mLμ ）：精密移取氯霉素标准中间液 A （10 μg/mL）（3.3.2）0.01 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为 0.01 μg/mL的氯霉素标准工 作液。临用新配。 3.4 材料 3.4.1 固相萃取小柱： Cleanert Silica ，2