蛋白质等电点的测定.pptVIP

第一页，共19页。 主要内容 (1)了解蛋白质的两性解离性质。 (2)学习测定蛋白质等电点的方法。 第二页，共19页。 蛋白质的解离性质 蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡： 第三页，共19页。 蛋白质的等电点 蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。 第四页，共19页。 最常用的方法是： ①测其溶解度最低时的溶液pH值。 ②等电聚焦电泳测其净电荷为零时的PH ③浊度、分光光度法 ④基于蛋白质与离子交换的作用 第五页，共19页。 一、测定溶解度最低时的溶液PH 实验原理： 借观察在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与酷酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。 第六页，共19页。 器材： 水浴锅、温度计、200毫升锥形瓶、100毫升容量瓶、吸管、试管、试管架、乳钵 试剂： (1)0.4％酪蛋白醋酸钠溶液 (2)1.00摩尔／升醋酸溶液 (3)