蛋白质的分离纯化与定性定量分析.pptVIP

优点 样品加样位置和体积不受限制； 分辨率高于其它类型电泳； 可测定pI值； 缺点 样品在pI区域易沉淀，为增加样品溶解度，可以在胶中加入尿素，但导致蛋白质失活； 样品前处理麻烦。 等电聚焦的优缺点 第六十页，共99页。 3. 双向电泳 将等电聚焦技术与SDS技术组合起来的新技术，是目前分离蛋白质混合物最强大的技术，也是蛋白质组学研究的重要技术。 基本步骤：第一相等电聚焦后，在等电聚焦的垂直的方向进行第二相SDS。 第六十一页，共99页。 pH 3 - - - - - - 10 （1） IEF 等电聚焦电泳 （2） SDS（3） 染色脱色 第六十二页，共99页。 考马斯亮蓝 银 染 第六十三页，共99页。 可综合利用层析和电泳分离纯化蛋白质 第六十四页，共99页。 第六十五页，共99页。 蛋白质的浓缩 超滤法 使用特制薄膜对溶液中的溶质分子进行选择性过滤的技术。 常用离心力使蛋白质透过滤膜，而使蛋白质截留在膜内。 第六十六页，共99页。 冷冻干燥法 在冷冻状态下使样品中水分升华而浓缩蛋白质的技术，保持蛋白质构象的最好方法。 注意：必须保证蛋白质始终处于冷冻状态（在－70℃冰箱预冷），为提高溶解度可加赋形剂（右旋糖酐、甘露醇等）。 第六十七页，共99页。 吸收法 采用吸水剂直接吸去蛋白质溶液中的水。 PEG、蔗糖、凝胶干粉等。 沉淀法 硫酸铵、P