实验二 动物体内磺胺药浓度测定.docxVIP

实验二 动物体内磺胺药浓度测定 院系：理学院 专业：农药学 学号：09310110020 姓名：王熠 实验二 动物体内磺胺药浓度测定 1、目的 掌握磺胺类药物在动物体血液和组织中浓度测定的方法――重氮化偶合比色测定法。 2、原理 不同时间采出的血样中具有游离氨基的磺胺药在酸性介质中与亚硝酸发生重氮化反应后，可与N-(1萘基）乙二胺产生偶合反应生成紫红色偶氮染料，与经过同样处理的磺胺药标准液比较，用721分光光度计比色法测出组织中和不同时间的血液中磺胺嘧啶浓度。 由于亚硝酸不稳定，在实验中，用三氯醋酸与亚硝酸钠反应制的得。 剩余的过量亚硝酸影响测定，用氨基磺酸胺分解除去。 3、实验材料 1、实验动物 兔子一只。 2、设备与器械 721分光光计、台秤、止血钳、眼科镊、手术刀、手术剪、保定架、注射器、烧杯、三角烧瓶、试管、漏斗、研钵、滤纸等。 3、药物与试剂 10%磺胺嘧啶钠注射液 15%三氯醋酸溶液 0.1%亚硝酸钠溶液 0.5%氨基磺酸胺溶液 0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液 磺胺嘧啶钠贮存标准液 磺胺嘧啶钠应用标准液 4、试验方法 1、磺胺嘧啶钠的血药浓度的测定 （1）取动物一只，称重，固定，剪毛，分离股动脉，近心端准备结扎线，远心端 剪断股动脉，采空白血0.5mL，放入加有15.5 mL蒸馏水的烧瓶中，混匀，放置15min。 （2）单剂量耳静脉注射（100mg/kg）注射10%磺胺嘧啶钠注射液2.3ml。 （3）采样： 静注采样时间：用药后25min、30min 、1h、2h、3h时，股动脉采血0.5ml。 （4）各血样0.5mL，加到15.5mL蒸馏水中，混匀，放置15min;再加15%三氯醋 酸4mL，混匀，放置2min，过滤。 （5）取试管3支，各加入滤液5mL，为测定管 取试管3支，加入空白对照液5mL，为空白管 取试管3支，加入应用标准液5mL，为标准管 （6）在以上各管中各加入0.1%亚硝酸钠溶液0.5mL，混匀，放置3min （7）各加入0.5%氨基磺酸胺溶液0.5mL，混匀，放置2min （8）各加入0.1%二盐酸N-（1萘基）-乙二胺溶液2.5mL，充分混匀，放置10min （9）用721分光光度计在550nm波长处比色。 以空白管校正光密度到0点，读取标准管和测定管光密度，计算游离磺胺药物含量。 （10）公式如下： 测定管光密度 游离磺胺药含量= ――――――― × 0.00375mg/ml×40 标准管光密度 2、组织磺胺药浓度测定方法 （1）采血后，将动物处死，取肌肉、肝脏、肾脏组织各2g。 （2）将组织剪碎，在研钵中加蒸馏水5mL研磨，取上清液，残渣用蒸馏水冲洗 并回收于刻度试管，共得16mL。 （3）加15%三氯醋酸4mL，混匀，静置后过滤。 （4）取滤液，处理同血药浓度测定。 （5）公式如下： 测定管光密度 游离磺胺药含量= ――――――― × 0.00375mg/ml×10 标准管光密度 五、实验结果 时间 编号 1 2 3 平均值 25min 0.160 0.160 0.160 0.160 表一： 血液中药物吸光度测定结果 30min 1h 2h 3h 0.258 / 0.450 0.640 0.189 0.238 0.210 / / / 0.446 0.439 0.446 0.640 0.550 0.580 标准液 0.079 / 0.008 0.082 空白液 0 0 0 0 组织 编号 1 2 3 平均值 表二：组织中药物吸光度的测定结果 肝 肾（稀释4倍） 0.480 0.500 0.473 0.484 0.600 0.600 0.560 0.587 肌肉（稀释8倍） 0.500 0.480 0.500 0.484 样品 浓度 25min 0.293 表三：药物浓度（mg/ml） 30min 1h 2h 3h 肝脏 0.384 / 0.816 1.170 0.886 肾脏 4.3 肌肉 7.09 六、结果讨论与总结 1、股动脉的分离手术操作。 由于平时操作机会较少，经验不足，动手能力不够，在分离股动脉时花费了较长的时间和精力。以致没有及时取到10min的血样，而是取得25min时的血样。 股动脉的分离与