探寻qPCR的成败分水岭.pptVIP

荧光定量PCR的“三驾马车” 有好的鞋子才能走得快，有好品质的车马才能帮 您走的更远。 好的RNA提取试剂 合适的反转录酶 高品质高扩增效率的荧光定量PCR试剂 荧光定量PCR开篇 荧光定量PCR贴士 荧光定量PCR参数解析 荧光定量PCR的“三驾马车” 荧光定量--TransGen Biotech 如何合理地设置荧光定量PCR反应？ qPCR实验的第一步：检验qPCR体系能否达到实验要求 用扩增曲线检验qPCR体系 用融解曲线检验qPCR体系 用标准曲线检验qPCR体系 用No-Template Control( NTC)检验qPCR体系（引物） 用No RT Control检验qPCR体系（模板） 反应结束后得到数据，如何分析数据、如何判断其是否可信？ 进而，如何进行实验的核心数据检测？ 荧光定量PCR参数解析--扩增曲线 Cycle Fluorescence baseline Threshold line 平台期 基线：采用前15个循环信号作为荧光本底信号。 阈值：缺省设置3～15个循环的荧光信号的标准差的10倍。 指数期，每个循环PCR产物量大约增加一倍。 平台期，随着反应的进行，反应体系组成成分的消耗，产物增长速度变慢，反应进入平台期。 指数 扩增期 荧光定量PCR参数解析-- CT值 CT值代表初始循环数。荧光定量PCR反应中的3-15个循环，有荧光但