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* 文档如有侵权，请联系本人协改正删除，内容如有不当之处，请联系本人改正或者删除，谢谢。 微生物细胞破碎原理和技术 为了研究细胞破碎, 提升其破碎率, 有必需了解多种微生物细胞壁组成和结构 微生物 革兰氏阳性细菌 革兰氏阴性细菌 酵母菌 霉菌 壁厚/nm 20-80 10-13 100-300 100-250 层次 单层 多层 多层 多层 主要组成 肽聚糖 （40-90%） 多糖 胞壁酸 蛋白质 脂多糖 （1-4%） 肽聚糖 （5-10%） 脂蛋白 脂多糖 （11-22%） 磷脂 蛋白质 葡聚糖 （30-40%） 甘露聚糖 （30%） 蛋白质 （6-8%） 脂类 （8.5-13.5%） 多聚糖 （80-90%） 脂类 蛋白质 一、细胞壁组成和结构 细菌破碎关键阻力来自于肽聚糖网状结构, 网状结构越致密, 破碎难度越大, 革兰氏阴性细菌网状结构不及革兰氏阳性细菌坚固; 酵母细胞壁破碎阻力也关键决定于壁结构交联紧密程度和它厚度; 因为霉菌细胞壁中含有几丁质或纤维素纤维状结构, 其强度比细菌和酵母菌细胞壁有所提升。 为了破碎细胞, 必需克服关键阻力是网状结构共价键。多种微生物细胞壁结构和组成差异很大, 壁结构不仅取决于遗传信息, 也取决于生长环境, 真菌壁结构还随发酵罐中混合机械作用而改变。 在用酶法或化学法来溶解细胞壁时, 细胞壁结构和组成显得尤其关键, 可用来作为选择溶菌酶和化学方法依据。 分 类 作 用 机 理 适 应 性 机 械 法 珠磨法 固体剪切作用 可达较高破碎率，可较大规模操作，大分子目的产物易失活，浆液分离困难 高压匀浆法 液体剪切作用 可达较高破碎率，可大规模操作，不适合丝状菌和革兰氏阳性菌 超声破碎法 液体剪切作用 对酵母菌效果较差，破碎过程升温剧烈，不适合大规模操作 X-press法 固体剪切作用 破碎率高，活性保留率高，对冷冻敏感目的产物不适合 非 机 械 法 酶溶法 酶分解作用 具有高度专一性，条件温和，浆液易分离，溶酶价格高，通用性差 化学渗透法 改变细胞膜的渗透性 具一定选择性，浆液易分离，但释放率较低，通用性差 渗透压法 渗透压剧烈改变 破碎率较低，常与其他方法结合使用 冻结融化法 反复冻结-融化 破碎率较低，不适合对冷冻敏感目的产物 干燥法 改变细胞膜渗透性 条件变化剧烈，易引起大分子物质失活 二、微生物细胞破碎技术 ＝＝＝＝基础说出 细胞破碎机理图 1、机械方法 为了粉碎微生物细胞, 常常选择机械方法, 因为它们处理量大, 破碎速度较快。采取这些方法, 细胞受到由高压产生高剪切力, 但在大多数情况下要采取冷却方法, 方便除去因为消耗机械能而产生过多热量, 预防生化物质破坏。 （1）珠磨机 研磨是常见一个方法, 它将细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝一起快速搅拌或研磨, 使达成细胞某种程度破碎。 高速组织捣碎机和Braun匀浆器是试验室规模细胞破碎设备, 利用玻璃小珠撞击微生物细胞而达成破碎目。 这些装置关键缺点是在破碎期间样品温度快速升高, 经过用二氧化碳来冷却容器可得到部分处理。 在工业规模破碎中, 能够采取高速珠磨机。在这种设备中, 因为圆盘高速旋转, 使细胞悬浮液和玻璃珠相互搅动, 细胞破碎是由剪切力层之间碰撞和磨料滚动而引发。 （2）高压匀浆器 采取高压匀浆器是大规模破碎细胞常见方法。利用高压迫使细胞悬浮液经过针形阀, 因为忽然减压和高速冲击撞击环造成细胞破裂。 在工业规模细胞破碎中, 对于酵母菌等难破碎及浓度高或处于生长静止期细胞, 常采取数次循环操作方法。 （3）X－press法 另一个改善高压方法是将浓缩菌体悬浮液冷却至－25℃至－30℃形成冰晶体, 利用500MPa以上高压冲击, 冷冻细胞从高压阀小孔中挤出。细胞破碎是因为冰晶体磨损, 包埋在冰中微生物变形所引发。此法称为X－press法, 关键用于试验室中。 该法优点是适用范围广, 破碎率高, 细胞碎片粉碎程度低以及活性保留率高。 该法对冷冰－融解敏感生化物质不适用。 （4）超声波法 细胞破碎是因为超声波空穴作用, 从而产生一个极为强烈冲击波压力, 由它引发粘滞性旋涡在介质中悬浮细胞上造成了剪切应力, 促进细胞内液体发生流动, 从而使细胞破碎。 对于不一样菌种发酵液、超声波处理效果不一样, 杆菌比球菌易破碎、革兰氏阴性菌细胞比革兰氏阳性菌细胞轻易破碎, 对酵母菌效果极差。 超声波振荡轻易引发温度猛烈上升, 操作时能够在细胞悬浮液中投入冰或在夹套中通入冷却剂进行冷却。 该法不适于大规模操作, 因为放大后, 要输入很高能量来提供必需冷却, 这是困难。