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第16练基因工程 （202X- 出花色基因C（图1）,拟将其与Ti质粒（图2）重组，再借助农杆菌导入菊花中。答复以下问题: HrJXilH I TOC \o 1-5 \h \z 如R I fioR I (S^? \ MMC—c Ti 版粒 I —潮业止子7 抗性耳因 J/ 图2 （1） PCR技术所用到的关键酶是 ,利用PCR技术扩增目的基因的前提是 要有一段己知目的基因的核甘酸序列.其目的是 ? ⑵图1是花色基因C两侧被EcoR I的切后所形成的末端结构，清写出EcoR I葩识别序列井 标出切点： （用“ L表示切点位置），图2中EcoR I醉所识别的位点应 在Ti质粒的 片段上。 （3）将导入目的基因的菊花细胞培养成植株需要利用 技术，其原理是 （4）在个体生物学水平上，如何鉴定转基因菊花培育足否成功？ .. 答案⑴热稳定DNA聚合tii（Taq 要根据这一?序列合成引物（2G AATTC T-DNA （3）植物组织培养 植物细胞具有全能性（4）观察转基因菊花是否表现出基因C所控制的花 色 解析（1）由于PCR技术应用了 DNA戏捷复制的原理.在高温怵况下进行，该过程篱要的关 捷的走然稳定DNA聚合酢：该过程中要有一段己加目的族因的核芬酸序列,以便根据这一 序列合成引物。（2）根据酵切后寿成的序列，可以推浏出EcoR I岛识别的序列为GAATTC, 且酶切位点为GAATTC：由于后续箱安将目的基因导入到攵体佃隐中，所以会将目的基因 转移至Ti质轻的T-DNA片段上。⑷目的去因的检测在个体水平上需要现祭到明夏的性状 变化或蚤白质的合成，曰此该迂程常要观察转g西菊花是否表现出基因C所控制的花色。 （202X.山东.25）水稻胚乳中含直链淀粉和支链淀粉.直链淀粉所占比例越小糯性越强。科 研人员将能表达出基因编殂系统的DNA序列转入水稻，实现了对直形淀粉合成的基因（此、? 基因）启动子序列的定点编辑，从而获得了 3个突变品系。 （1） 将能表达出基因编辑系统的DNA序列插入Ti ，重组萩体进入 水稻细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程称为 抵 （2） 根据启动子的作用推删.取『基因启动子序列的改变影响了 ?从而改 变了也i基因的转录水平。与野生型水稻相比，3个突变品系中此丫基因控制合成的宜说淀 粉合成阴的敏基酸序列 (填“发生”或“不发生”)改变，原因是 o 为检测启动子变化对I防基因表达的影响，科研人员需要检测世i?基因转荥产生的mRNA (Wx mRNA)的址,检测时分别提取各品系胚乳中的总RNA.经 过程获得总 cDNA。通过PCR技术可在总cDNA中专一性的扩增出 业丫基因的cDNA,原因是 O 各品系舲mRNA量的检测结果如下图.据图推测糯性最强的品系为 ，原因是 L5l.)(.5o (VMrlp?NNEM1 L5l.)(.5o (VMrlp?NNEM1 答案(I)限制性核酸内切的和DNA连接酹 转化 RNA聚合前与启动子的识别和结合不发生编码直链淀粉合成酬的碱基序列中不含启 动子 逆转录(或反转录)引物是根据Wr基因的一段序列设计合成的(或引物能与Wx基因 的cDNA特异性结合) 品系3品系3的Wv mRNA ?最少，控制合成的直链淀粉合成酣的景最少，直焚淀粉合 成撤最少，格性最强 解析 ⑴构建基因表达我体需要限制枚核酸内切酶和DNA ?注援酶.可以对目的基因和我体 进行切割命连接.受组我体进入受体缅胞内维持秘定和表达的过程称为转化。(2)RNA聚合 酶与启动子识别和诂会后启动转知 启动子的序列改变会影响与RNA聚会酶的识别和姑会, 从而改变基因的转录，3个突麦品系中变的是启动子的序列，翌响mR、A的转录，而编玛 立诞淀粉合成酩的城基序列中不含有启动子的序列.所以编玛合成的立键淀粉笏的/基酸序 列不发生改变° (3)通过mRNA获得cDNA是逆捋录(或反格汶)泣程。PCR泣程中需要模板、 原轩、酶、引物等，其中引物是根据基因上的一段序列合成的，这掉妥从总cDNA中专 一姓的扩培出Wv基因的cDNA.关触是娑根据此丫基因的一杖用列合成出相应的引物。 (4)据翅中信息可知，水稻胚乳中直供淀扮所占比例越小，椎性越强，藏图中品系3中的 I诳mRNA量鼠少，这样合成的立链淀粉合成酶的量最少，那么合成的吏链淀粉所占比例潴小， 枝性最强。 人血清白蛋白(HSA)具有国要的医用价值.以下图是以基因工程技术获取HSA的两条途径, 其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色“答复以下问题： 报告革因 抗生?1 植物阳枷也勺转AWMtft构 性 ?wz^^ HAS 口一fg怆受体刎胞工转耳因绵羊 ⑴基因工程中可通过PCR技术扩增目的基因。生物体细胞内的DNADNA 双徒的蓟是 :在休外利用PCR技术扩增目的基因时，使反响体系中