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— PAGE \* Arabic 1 — 河豚毒素的药用价值研究报告 河豚毒素的药用价值研究报告  学院：海洋生命学院  专业：生物化学与分子生物学  年级：08级  姓名：张苗茵  学号：040012008154  指导老师：姜国良   第一章河豚毒素背景介绍  根据历史记载，古埃及人最早发现了有毒的河豚鱼，在古埃及第五王朝（约公元前2500年）的贵族坟墓中有类似河豚鱼（Tetraodon lineatus）的图形。在中国和日本，大约2000年前出现关于食用河豚中毒的记载。1889年，日本学者开始研究河豚鱼体内毒素的理化性质，此后，河豚鱼体内的毒素被命名为河豚毒素（tetrodo toxin,TTX)。至1964年，河豚毒素的分子式（C11H17N3O8)及其化学结构得以确定[1]，河豚毒素研究得到了生物学家、毒理学家、化学家和药理学家的广泛关注, 逐步阐明了河豚毒素的理化特征及毒性作用机制。对于河豚毒素在生物中的分布与来源、化学特征、分析检测方法、中毒与治疗、药理学作用等方面都已有相关的综述[ 2]。  1 河豚毒素在生物中的分布  在很长一段时间内，河豚毒素被认为是河豚鱼中特有的一种有毒物质。直到1964年，人们在蝾螈体内发现的毒素也被确定为河豚毒素，才改变了这种看法。由随后的研究表明，河豚毒素存在于一系列不同进化水平的海洋生物和少量的两栖动物体内。目前，人们在细菌和放线菌，甲藻、红藻、扁形动物门、纽形动物门、软体动物门、环节动物门、节肢动物门、棘皮动物门、脊索动物门、毛颚动物门中的许多生物中都曾检测到河豚毒素[3]。  2 河豚毒素的同系物  在河豚鱼中，河豚毒素与其同系物是同时存在的。河豚毒素的同系物种类很多，目前从河豚、钮虫、两栖类等生物体内分离得到的同系物包括：4-epi TTX, 6-epi TTX, 11-deoxy TTX, 11-nor TTX-6(R)-ol等，这些同系物可能与河豚毒素的代谢或生物合成有关。在河豚毒素的同系物中，5-deoxy TTX, 5,6,11- trideoxy TTX, 4-Cys TTX等毒性较低甚至无毒，而11-oxo TTX 虽然比较罕见，其毒性却是TTX的4-5倍[3]。  3 河豚毒素的生态作用  河豚毒素及其同系物在生物界分布如此广泛，说明河豚毒素具有相对重要的生态作用。通过实验检测，在含有河豚毒素及其同系物的生物中，其重要分布在生物的体表或消化道、肝脏、卵巢等内脏中。河豚毒素在生物体内的分布位置与其生态作用密切相关。由其分布在体表可以推测，河豚毒素的其中一个重要功能在于防御和保护，或者是警示威慑周围捕食者。分布于生物体表或者体内的河豚毒素具有重要的保护作用, 可以警示或威慑其捕食者。  另一些研究表明，河豚毒素可以在不是过程中发挥作用。蓝纹章鱼（Hapalochlaena maculosa）和几种含毒的毛颚动物（Chaetognath）能够分泌还有TTX的毒液，分泌毒液的腺体分别位于章鱼和箭虫的后腮腺和口中的乳突中，在咬食的同时，毒液就会进入被捕食的生物体内，将其麻痹[4]，其作用原理大致与毒蛇通过毒牙上的管道将毒液注入食物体内导致其身亡相类似。  第二章河豚毒素的提取和检测  河豚毒素在自然界生物体内分布广泛，且因其具有镇痛、降压、抗心律失常、局部麻醉、  戒毒及抑制肿瘤的功效[5]，而且能特异性阻滞钠离子通道[6]，而且能特异性阻滞钠离子通  道,在生理学研究中，已经成为机制研究的工具药，因此具有极高的经济价值和医疗价值。针对河豚毒素的提取和检测方法，也已经有大量研究报道。  1 河豚毒素的提取  自1909年首次从河豚鱼中发现了TTX，并创建了提纯分离TTX粗制品的方法，后经过改良，运用层析柱技术分离得到TTX结晶。随后又从红鳍东方豚、紫色东方豚卵巢中单独分离出结晶态TTX。  2 河豚毒素的检测  2.1 生物检测法  20世纪40年代，美国学者建立了用小鼠生物实验检测TTX的方法[7]。该方法操作简便，但费时费力，且重现性差，缺乏特意性, 一般可用于TTX 的定性分析。根据TTX 对钠离子通道的阻滞作用与细胞的成活率之间的关系, 有学者建立了组织培养法。随后又有学者将其改良并建立了定量比色细胞分析法, 快速溶血法则通过观察受TTX保护而未发生破裂的红细胞的数量来估算TTX 的量[5]。  2.2 理化检测法  20世纪70年代以后，随着仪器分析技术的发展，TTX的各种理化检测方法相继建立。由于TTX在强碱的作用下会发生降解，生