微生物来源的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶抑制剂2264a和b的研究.docxVIP

微生物来源的次黄喋吟一磷酸盐脱 氢酶抑制剂2264 A和B的研究 【摘要】利用自建的快速高效的次黄 喋吟一磷酸盐脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase , IMPDH抑 制剂的高通量筛选模型， 筛选分离得到两个 活性化合物2264 A和B,通过对其紫外、质 谱、核磁等理化数据的分析确定 2264 A为 cyclopenol , 2264 B 为 viridicatol 。2264 A和B对IMPDH勺IC50分别为、从mol/L ; 体外脾淋巴细胞增殖实验显示 2264 A和B 分别在和从mol/L浓度下可完全抑制由ConA 活化的脾淋巴细胞增殖，表明 2264 B在分 子水平和细胞水平均表现出较好的免疫抑 制活性，2264 A的活性相对较弱。 【关键词】次黄喋吟一磷酸盐脱氢酶； 免 疫抑制剂；Cyclopenol ; Viridicatol ABSTRACT Inosine monophosphate dehydrogenase (IMPDH) is an essential rate limiting enzyme in the purine metabolic pathway, catalyzing the de novo synthesis of purine nucleotides required for lymphocyte proliferation. IMPDH has therefore been an attractive target for developing immunosuppressive drugs. This investigation was to discover new IMPDH inhibitors from metabolites of microorganism, and two active compounds 2264 A and B were isolated. 2264 A and B were identified to be cyclopenol and viridicatol by their physicochemical properties, MS, 13C NMR and 1H NMR analysis. IC50 of 2264 A and B were 昏 mol/L and 昏 mol/L to IMPDH, respectively, and they could completely inhibit the spleen lymphocytes proliferation stimulated by ConA at 昏 mol/L and 昏 mol/L in vitro. 2264 A and B showed moderate inhibitory activity to IMPDHand spleen lymphocytes proliferation. KEY WORDS Inosine monophosphate dehydrogenase; Immunosuppressant; Cyclopenol; Viridicatol 免疫抑制剂在临床上应用广泛，不仅能够 有力地推进临床器官移植的实施，延长移植 物的存活率，改善器官移植患者的生存质量， 同时也为许多自身免疫性疾病如红斑狼疮、 类风湿病等的治疗开辟了广阔的应用前景。 但是现有的免疫抑制剂在临床应用中仍然 存在不同程度的毒副作用、治疗对象和方案 较局限等缺点，普遍存在一些严重不良反应， 如肝毒、肾毒、神经毒性、消化道反应、内 分泌系统失调、皮肤损坏和致癌作用等。因 此开发全新的低毒、高效免疫抑制剂很有必 要［1, 2］。 次黄喋吟一磷酸盐脱氢酶（inosine monophosphate dehydrogenase , IMPDH是 鸟喋吟核昔酸经典合成途径的限速酶， IMPDHg抑制将导致鸟喋吟核昔酸缺乏，DNA 合成受阻，使细胞静止于 G1期，因此其活 性与细胞增殖紧密联系。这种酶的抑制剂被 发现具有抑制免疫力的作用:3, 4］,因此 IMPDH?为免疫相关疾病药物的重要靶点。 为了研究和发现更加有效和低毒的免疫抑 制药物先导化合物，本研究利用以IMPDH 靶点的高通量筛选模型从微生物的代谢产 物中进行药物筛选，并从阳性菌株 2264的 发酵产物中分离得到活性化合物 2264 A和B。 本文报道了 2264 A和B的筛选、发酵、分 离纯化、结构鉴定及其生物学免疫活性。 1材料与方法 筛选用微生物的菌株 真菌菌株2264由本室从5000株真菌中筛 选得到。 试剂及仪器 人类II型IMPDHS达质粒由本实验室构建； DH由本实验室保存；NA