核酸专题知识讲座.ppt

当DNA稀盐溶液加热到80-100℃时, 双螺旋结构即发生解体, 两条链相互分开, 形成无规线团。 DNA变性后, 它一系列性质也随之发生改变, 如紫外吸收(260 nm)值升高, 粘度降低等。 影响Tm原因: （1）G-C相对含量 （G+C）% =（Tm — 69.3）× 2.44 （2）介质离子强度低, Tm低。 （3）高pH下碱基广泛去质子而丧失形成氢键能力。 （4）变性剂如甲酰胺、尿素、甲醛等破坏氢键, 妨碍碱基堆积, 使Tm下降。 (二) 核酸复性（退火） 变性DNA在合适条件下, 两条相互分开单链能够重新缔合成为双螺旋结构, 这一过程称为复性。DNA复性后, 一系列性质将得到恢复, 不过生物活性通常只能得到部分恢复。 DNA复性程度、速率与复性过程条件相关。 将热变性DNA骤然冷却至低温时, DNA不可能复性。不过将变性DNA缓慢冷却时, 能够复性。分子量越大复性越难。浓度越大, 复性越轻易。另外, DNA复性也与它本身组成和结构相关。 DNA复性 影响复性速度原因: （1）单链片段浓度 （2）单链片段大小 （3）片段内反复序列多少 （4）溶液离子强度大小 （5）溶液温度高低 (三) 核酸杂交 热变性DNA单链, 在复性时并不一定与同源DNA互补链形成双螺旋结构, 它也能够与在一些区域有互补序列异源DNA单链形成双螺旋结构。 这么形成新分子称为杂交D