菌株培养操作规程.pdfVIP

菌株培养操作规程 1. 菌株培养 1.1 仪器的灭菌 将养菌所需的所有仪器放在高压锅内灭菌，然后放入烘箱烘干， 在实验操作前 30min 放入无菌操作台，打开紫外灯，待用。 1.2 培养基的配制 按照配方配置肉汤固体培养基 250ml，肉汤液体培养基 250ml， 120 度高压灭菌，放置于冰箱 4℃备用。（培养基的配制参照《微生 物学实验》，徐威主编，中国医药科技出版社，第 172 页，微生物 实验常用培养基配方） 1.3 菌株传代 将高压灭菌完的固体培养基在酒精灯上融化，待温度降到 45℃ 左右，取无菌培养皿，打开，沿着培养皿一侧倒入固体培养基，倒 入的量是培养皿体积的 1/3 时停止，将培养皿盖好盖子，放在无菌 0 操作台上，待培养基凝固。取出从医院拿回的菌株（标记为 F 代， 一直储存在 4 ℃，在操作前半个小时放在室温下适应），用接种环 取一环接种于凝固好的固体培养基上，放入 37℃细菌培养箱中培养 18h。 培养 18h 后，得到 F1 代菌，将其保存于冰箱 4℃（从医院取回 的菌株数量有限，并且不能长期保存，为了后面的实验有足量的菌 1 株完成实验，所以大量传代得到 F 代菌，保存于冰箱，以后的实验 1 都是从 F 代菌开始进行）。 2. 菌株保存 2.1 菌株短期保存 0 1 从医院取回的菌株（ F 代） , 通过传代得到 F 代菌，用胶带将培 养皿封存好，放置于冰箱 4℃保存，称为短期保存。短期保存的时 间一般为 20 天到一个月。 2.2 菌株的长期保存 取无菌培养皿，倒入融化的固体培养基，待培养基凝固后，用 1 接种环取一环 F 代菌接种于培养皿上，放入 37℃细菌培养箱培养 2 18h 得到 F 代菌。用移液枪取 2ml 无菌液体培养基于试管中，用接 2 种环取一环 F 代菌接种于试管中，放入细菌培养箱培养 8h。取 100ml 无菌锥形瓶，倒入 50ml 液体培养基，用移液枪从试管中取 3 0.5ml 菌液于 100ml 锥形瓶中， 37℃摇床培养 16h 得到 F 代菌。将 3 买回的甘油配成 80%浓度，然后将甘油和 F 代菌液按体积比 1:1 混 合，再用移液枪将混合液吸入冻存管中， 1ml/ 管，在冻存管上用记 号笔标记冻存菌液的名称，代数，日期，放入冰箱 -20 ℃保存，保存 年限为 1-2 年，此保存法称为“甘油管冻存法”。（菌种的保存参 照《微生物学实验》，徐威主编，中国医药科技出