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工业微生物菌种的选育——诱变选育（ 1） 工业微生物菌种的选育——诱变选育（ 1） 诱变选育 诱变育种是指利用各种诱变剂的物理因素和化学因素处理 微生物细胞，提高基因突变频率，再通过适当的筛选方法获 得所需的高产优质菌种的育种方法。诱变育种具有速度快、 方法简便等优点，是当前菌种选育的一种主要方法，使用普 遍。诱变育种的理论基础是基因突变，所谓突变是指由于染 色体和基因本身的变化而产生的遗传性状的变异。 诱变育种的步骤与方法 （一）、工业育种的一般步骤（图） （二）、诱变育种方案设计 诱变育种方案包括突变的诱发、突变株的筛选和突变高产基 因的表现。 1、出发菌株的选择 工业上用来进行诱变处理的菌株，称为出发菌株。出发菌株 选择目前主要依据实际经验，总结如下： ①以单倍体纯种 为出发菌株； ②采用具有优良性状的菌株；③选择对诱变 剂敏感的菌株；④许多高产突变往往要经过逐步累积的过 程，才变得明显，所以有必要多挑选一些已经过诱变的菌株 为出发菌株，进行多步育种，确保高产菌株的获得。 2、出发菌株的纯化 为什么要对出发菌株进行纯化呢？这是因为微生物容易发 生变异和染菌，同时一般丝状菌的野生菌株多为异核体。生 产菌在不断移代过程中，菌丝间接触、吻合后，易产生异核 体、部分结合子、杂合二倍体及自然突变株等。这些都会造 成细胞内遗传物质的异质化，使遗传性状不稳定。通过纯种 分离，从中挑选所需的优良菌株。常用划线分离和稀释分离 法，并结合显微镜操纵器分离单孢子。 3、单孢子悬液的制备 诱变育种要求所处理的细胞必须是处于对数生长期同步生 长的细胞，并且是均匀状态的单细胞悬液。 首先是细胞的生理状态对诱变处理也会产生很大的影响，如 细菌在对数期诱变处理效果较好；霉菌或放线菌的分生孢子 一般都处于休眠状态，所以培养时间的长短对孢子影响不 大，但稍加萌发后的孢子则可提高诱变效率。 其次是分散状态的细胞可以均匀地接触诱变剂，又可避免长 出不纯菌落。由于在许多微生物的细胞内同时含有几个核， 所以即使用单细胞悬浮液处理，还是容易出现不纯的菌落。 若诱变剂产生的突变只在 DNA 双链中的某一条单链，故该 突变无法反映在当代的表型上。只经过 DNA 的复制和细胞 分裂，表型才会发生变异，出现不纯菌落，这就叫表型延迟 (phenotypic lag) 。不纯菌落的存在，也是诱变育种工作中初 分离的菌株经传代后很快出现生产性状 #8220; 衰退 #8221; 的主要原因。 （1）供试菌株的孢子或菌体的选择 供试细胞要新培养的，细胞生理活性既要同步，又要在最旺 盛的对数期，这样突变率高，重现性也好。对细菌来说，常 常通过前培养达到要求。菌悬液中的菌体应该是单细胞或单 核的孢子，不但能均匀地接触诱变剂，还可减少分离现象发 生。在实际工作中，要得到均匀分散的细胞悬液，通常可用 无菌的玻璃珠来打散成团的细胞，然后再用脱脂棉或滤纸过 滤。 菌悬液的细胞浓度一般控制为：真菌孢子或酵母细胞 10 6 ~ 10 7 个/ml ，放线菌或细菌 10 8 个/ml 。菌悬液一般用生理盐 水（ 0.85%NaCl ）稀释。有时，也需用 0.1mol/L 磷酸缓冲液 稀释，因为有些化学诱变剂处理时，常会改变反应液的 pH 值。 （2 ）菌悬液制备方法 细菌：在诱变处理前进行摇瓶振荡培养，利用温度和碳源控 制其同步生长，离心洗涤，用冷生理盐水或缓冲液制备菌悬 液，放在有玻璃珠的三角瓶内振荡 10min ，用无菌脱脂棉或 滤纸过滤，通过菌体计数，调整菌悬液的浓度。孢子：在试 验中尽量采用成熟而成熟的孢子，并置于液