8561444_吴玉晗_基于免疫侧向层析食品中抗生素残留检测方法研究_吴玉晗-基于免疫侧向层析食品中抗生素残留检测方法研究.pdf

致 谢 时光匆匆而逝，转眼三年硕士生生涯即将接近尾声，在这临近毕业的时刻， 回顾这三年的科研求学生活，感慨万千。想起这三年的点点滴滴，有不断优化终 于找到最优条件的喜悦，有不断查阅文献尝试各种方法仍不能得到满意结果的挫 败；也有找不到方向经老师指导后的恍然大悟，实验结果不好心情沮丧时同窗好 友不断鼓励的温暖；这三年，有喜悦、有挫败、有温暖、有不舍、有眷恋，更多 的是感谢和感恩。感谢不断努力想成为更好自己的曾经的我，感恩不断鼓励我、 关心我、帮助我的老师、家人、同学和朋友。 首先，我要特别感谢我的导师xx老师，陈老师知识渊博，治学严谨，在 生活中也是个幽默风趣、关心学生的好老师。想起每周日组会时，陈老师每 次都会对我们说“时间问题”“要珍惜时间”，老师对时间的珍惜让我难以忘 怀。在学校三年的研究时光，陈老师的工作热情、治学态度、胸怀气度也深 深影响着我，可以说我的每一点进步都离不开老师的耐心指导和悉心教导， 本论文的顺利完成更是凝集了老师的大量心血。 同时，我也要感谢实验室的xx师姐和xxx、xx师兄，同学xx、xx和xxxx ，以及师弟师妹们xxx、xxx、xx、xx，大家一起共同营造了一个温馨有爱 的实验室大家庭。 感谢我的其他几位校园同学在这三年来的理解与支持！ 感谢学院2017 级全体同学陪我一起走过的这段令人难忘的青葱岁月！ 感谢我的家人们，他们在精神和生活上永远都是我最坚实的后盾！ 最后，衷心感谢在论文审阅、评议、答辩中给予指导的各位专家！ I 摘 要 随着人们生活质量的提高，食品安全问题越来越被广大消费者所关注，特别 是抗生素等药物残留问题，更是广大消费者所关注的焦点问题。所以建立快速、 便捷、灵敏的抗生素残留检测方法对预防食品安全问题的发生和保护人类健康具 有重要意义。因此，本文针对食品中残留危害较为严重的四环素类、青霉素类抗 生素，建立了三种免疫侧向层析快速检测方法： 1 （）四环素传统型免疫侧向层析试纸检测方法建立 本方法是基于抗原抗体免疫识别和侧向层析竞争法实验原理对四环素进行试 纸检测，在金纳米粒子表面标记四环素单克隆抗体，T线固定四环素包被原，C T C 线固定羊抗鼠二抗，肉眼通过观察 线和 线是否显线定性分析四环素的存在状 况，结合扫描线条灰度进行四环素定量分析。本实验对偶联抗体量、偶联时碳酸 钾添加量、封闭剂种类和金纳米粒子粒径大小关键实验参数进行优化，在最优实 验条件下，对四环素的检测在 10min 内完成，裸眼观察的灵敏度为 10ppb，标 准曲线检测线性范围为0.2-10ppb。本方法同样适用于牛奶样品中的四环素含量 检测，检测结果与标准品检测结果高度一致，不受基质效应干扰。 2 （）四环素增敏型免疫侧向层析试纸检测方法建立 本方法以胶体金免疫侧向层析试纸为基础，加以改进，放弃了使用金标垫的 传统试纸条检测方法，采用目标物与金标抗体提前孵育后直接上样的方法，通过 增强标记抗体与目标物的结合效率使检测灵敏度得到显著提高。本实验对增敏抗 体偶联量、偶联时碳酸钾添加量、金标抗体复溶液用量进行优化，确定最佳实验 参数。在最优实验条件下，对四环素的检测在 10min 内完成，裸眼观察灵敏度 2ppb 5 0.05-2ppb 为 ，相比于传统方法提高了 倍。标准曲线线性范围为 。本方法 同样适用于检测牛奶样品中的四环素含量，检测结果与标准品检测结果高度一 致，在抗生素残留快速检测领域内有巨大应用潜力。 3 （）四环素和青霉素增敏型免疫侧向层析试纸双重检测方法建立 本方法以胶体金免疫侧向层析试纸为基础，加以改进，放弃了使用金标垫的 传统试纸条检测方法，采用检测物与金标抗体提前孵育后上样的方法，同时对四 环素和青霉素进行快速检测。本方法在胶体金表面分别标记四环素单克隆抗体和 青霉素单克隆抗体，T线分别固定四环素包被原和青霉素包被原，C线固定羊抗 鼠二