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微生物鉴定常用生理生化试验实验报告计划 微生物鉴定常用生理生化试验实验报告计划 PAGE / NUMPAGESPAGE 微生物鉴定常用生理生化试验实验报告计划 山东大学实验报告 2017年12月4日 ___________________________ 科目：微生物学实验 题目：微生物判定常用的生理生化试验 姓名：丁志康 一、目的要求 证明不一样微生物对各样有机大分子的水解能力不一样，进而说明不一样微生物有着不一样的酶系统。 掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 认识糖发酵的原理和在肠道细菌判定中的重要作用。 掌握经过糖发酵鉴识不一样微生物的方法。 认识IMViC反响的原理及其在肠道细菌判定中的意义和方法。 二、基来源理 1、生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不可以直接利用，一定靠产生的胞外酶将大分子物质分 解才能被微生物汲取利用。胞外酶只需为水解酶，经过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。这些过程均可经过察看细菌菌落四周的物质变化来证明；淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的地区，用碘测定不在产生蓝色，表示细菌 产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培育基的pH，使pH降低，加入培育基的中性红指示剂会使培育基从淡红色变为深红色，说明胞外存在着脂肪酶。 2、糖发酵试验是常用的鉴识微生物的生化反响，在肠道细菌的判定上尤其重要。绝大部分细 菌都能利用糖类作为碳源和能源， 可是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差别。 有些细菌 能分解某种糖产生有机酸（如乳糖、醋酸、丙酸等）随和体（如氢气、甲烷、二氧化碳的等）；有些细菌只产酸不产气。比如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不可以分解乳糖；一般变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不可以分解乳糖。发酵培育基 含有蛋白胨，指示剂（溴甲酚紫），倒置的德汉氏小管和不一样的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（）变为黄色（）。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。 3、IMViC反响是吲哚试验、甲基红试验、伏-普试验和柠檬酸试验4个试验的首字母缩写。这四个实验主若是用来迅速鉴识大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌检查。 （1）吲哚试验：某些细菌有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸形成吲哚（靛基质），吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。 2）甲基红试验：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步被分解成为甲酸、乙酸、琥珀酸等，使培育基pH降落至以下，加入甲基红指示剂可呈红色。如细菌 分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转变为其余物质（如醇、醛、酮、气体和水），培育 基pH在以上，加入甲基红指示剂呈橘黄色。本试验常与V-P试验一同使用，由于前者呈阳性的细菌，后者往常为阴性。 （3）伏-普（二乙酰）试验：某些细菌能发生以下变换：葡萄糖→丙酮酸（脱羧）→乙酰甲基甲醇→2，3—丁烯二醇，在有碱存在时氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用产生粉红色的化合物。本试验目的在于测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力。 4）柠檬酸试验：当细菌利用铵盐作为独一氮源，并利用柠檬酸盐作为独一碳源时，若细菌 能利用这些盐作为氮源和碳源而生长，则能利用柠檬酸钠产生碳酸盐，进而与利用铵盐产生的氨反响，形成NH4OH，使培育基呈碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝（BTB）由淡绿转为深蓝。 三、 器械 菌种:枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，产气杆菌，铜绿假单胞菌，一般变形杆菌，金黄色葡萄球菌。 培育基:固体淀粉培育基，蛋白胨水培育基，葡萄糖蛋白胨水培育基，葡萄糖发酵培育基，乳糖发酵培育基。 溶液或试剂:革兰氏染色用卢戈氏碘液，甲基红试剂，.试剂，吲哚试剂。 仪器或其余器具:无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，试管架，酒精灯，小玻璃管。 四、 操作步骤 （一） 淀粉水解试验 将固体淀粉培育基消融后冷却至50℃左右，无菌操作制成平板。 用记号笔在平板底部划成四部分。 将枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单细胞菌分别在不一样的部分点点接种，在平板的反面分别在四部分写上菌名。 将平板倒置在37℃温箱中培育24h。 察看各样细菌的生长状况，将平板翻开盖子，滴入少许卢戈氏碘液于平皿中，轻轻旋转平板，使碘液平均铺满整个平板。如菌苔四周出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，为阳 性。透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉酶能力的强弱，即产生胞外淀粉酶活力的高低。 （二） 糖发酵试验 用记号笔在各试管外壁上分别注明发酵培育基名称和所接种的细菌菌名。 取葡萄糖发酵培育基试管3支，相同分别接入大肠杆菌，一般变形杆菌，第三支不接种，作为比较。 在接种后，轻缓摇动试管，使其平均，防