微生物限度检查对策计划验证方案.docx

微生物限度检查对策计划验证方案 微生物限度检查对策计划验证方案 PAGE / NUMPAGESPAGE 微生物限度检查对策计划验证方案 微生物限度检查方法考证方案 微生物限度检查法考证方案 1。目的: 为确认所采纳的方法合用于药品微生物限度检查， 包含细菌、霉菌、 酵母菌和比较菌的计数，特拟订本考证方案。经过比较试验菌的复苏 生长结果，评论整个试验方法的正确性、有效性和重现性，进而确立 试验样品在实验条件下无抑菌活性或抑菌活性可忽视不计。 所采纳的 方法合用于该品种的微生物限度检查。 考证过程应严格依据本计划规定的内容进行。因特别原由确需更改 的，应填写《考证计划更改申请书》，报考证领导小组同意。 2.范围: 本考证计划合用于微生物限度检查方法的考证。 3。规范性引用文件: 依据《中国药典》XXXX版附录二附录九J微生物限度检查法的要求，因为部分试验品的抗菌活性，当已成立的微生物检查方法或产品的成散发生变化或原检查方法的检查条件发生变化时，可能会影响检查结果的正确性。所以，一定考证测试物件的抗菌活性和测试方法的靠谱性。4.考证和实行: 试验前准备: 试验设施的准备:试管、刻度移液器、薄膜过滤器、滤膜(孔径 ，直径50毫米)、平皿、空三角瓶、称重纸等。试验要求用牛 皮纸包裹，放在湿热灭菌器中，在 121℃灭菌30分钟，3天内使用 试验培育基的制备:取脱水培育基如营养琼脂培育基、玫瑰红 钠琼脂培育基、营养肉汤培育基、胆盐乳糖培育基 (BL)、改进马丁琼 脂培育基、4-甲基伞形酮葡萄糖醛酸苷培育基 (MUG)等经合用性查验 合格的脱水培育基，按相应的制备说明用纯净水配制，分装， 2小时 内放入湿热灭菌器中， 121℃灭菌15分钟，3周内使用 试验用稀释液/缓冲液和冲刷液的配制:取有效期内的试剂，配制无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9% 无菌氯化钠溶液、0.05%(毫升/毫升)聚山梨酯80无菌氯化钠溶液和 0.05%(毫升/毫升)0.9%氯化钠溶液等。依据相应的制备方法，用纯净 水配制，加热溶解，过滤，分装， 121℃灭菌15分钟，3周内使用 试验菌的制备和稀释: 细菌、霉菌和酵母菌计数法考证菌液 : 取少许新鲜培育的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢 杆菌，接种于10毫升营养肉汤中，在 30-35℃培育18-24小时；将新 鲜白色念珠菌培育物接种到改进的马丁培育基中，在 23-28℃培育 24-48小时；将黑曲霉的新鲜培育物接种到改进的马丁琼脂斜面培育 基上，在23-28℃培育5-7天 将上述大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色 念珠菌的均匀培育物(细菌悬液)用0.9%无菌氯化钠溶液稀释两次，以 制备每毫升细菌含 50-100伏的测试细菌溶液。将3-5毫升含0.05%(毫 升/毫升)聚山梨醇酯80的0.9%无菌氯化钠溶液加入到改进的黑曲霉马丁琼脂斜面培育基中，洗脱孢子(细菌悬液)，用含0.05%(毫升/毫升) 聚山梨醇酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制备每 1毫升细菌含50-100℃ fu的试验孢子溶液 在测试上述细菌液体时，应将 1毫升液体注入培育皿中， 培育并计数。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌在 30-35℃ 的营养琼脂培育基中倒置培育 48小时，白色念珠菌和黑曲霉在 23-28℃的玫瑰钠琼脂培育基中倒置培育 72小时 比较菌查验方法考证用菌液 : 将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型副伤寒杆菌和铜绿假 单胞菌的新鲜培育物稍微接种于 10毫升的营养肉汤中，将生孢梭菌 的新鲜培育物稍微接种于 12毫升的巯基乙酸液体培育基中，在 30-35℃下培育18-24小时 取上述均匀培育物(细菌悬液)，用0.9%无菌氯化钠溶液加 倍稀释，制成每毫升细菌含 10~100伏的供试品溶液。 在检测上述菌液时，取 1毫升注射皿和营养琼脂培育基， 在30~35℃下倒置培育48小时并计数。 供试品溶液的制备: 依据供试品的理化特征和生物学特征，采纳适合的方法制备 供试品溶液 4年4月日，取养胃舒软胶囊 5克，加入装有溶解的(温度不超出 45℃)5克司盘80、3克单硬脂酸甘油酯和 10克聚山梨醇酯80无菌混 合物的烧杯中，用无菌玻璃搅拌成球，迟缓加入 45℃的无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液至 100毫升，边搅拌边加入，使试样充足乳化，作为1∶ 的试验溶液 当制备试验溶液需要水浴加热时，温度不得超出45℃，时间不得超出30分钟。细菌、霉菌和酵母菌计数考证方法: 考证试验分为 4组。依据“微生物限度检查法”，对不一样批次 的3个样品分别进行3次独立的平行试验，分别计算出试验样品组和比较试验组的细菌回收率为256±199 试验组: 平板法:将1毫升试验液和1毫升试验菌液(含菌量50~ 100cfu)按1:20的比率分开，注入同一个直径 90毫米的灭菌平板中