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第十五章DNA损伤与修复DNA Damage and Repair各种体内外因素所导致的DNA组成与结构的变化称为DNA损伤（DNA damage） DNA损伤的后果:一、DNA的结构发生永久性改变，即突变 二、导致DNA失去作为复制和/或转录的模板的功能 生物多样性依赖于：平衡DNA突变DNA修复第一节DNA损伤DNA Damage一、多种因素通过不同机制导致DNA损伤（一）体内因素 DNA复制错误 DNA自身的不稳定性 机体代谢过程中产生的活性氧（二）体外因素物理因素化学因素生物因素物理因素：电离辐射、紫外线(ultra violet, UV)化学因素：自由基导致的DNA损伤碱基类似物导致的DNA损伤 碱基修饰剂、烷化剂导致的DNA损伤 嵌入性染料导致的DNA损伤 物理和化学因素对DNA的损伤 二、DNA损伤有多种类型 碱基脱落碱基结构破坏嘧啶二聚体形成DNA单链或双链断裂DNA交联碱基损伤与糖基破坏：化学毒物可通过对碱基的某些基团进行修饰而改变碱基的性质。由于碱基损伤或糖基破坏，在DNA链上可能形成一些不稳定点，最终可导致DNA链的断裂。碱基之间发生错配 ：碱基类似物的掺入、碱基修饰剂的作用可改变碱基的性质，导致DNA序列中的错误配对。在正常的DNA复制过程中，存在着一定比例的自发碱基错配。最常见的是组成RNA的尿嘧啶替代胸腺嘧啶掺入到DNA分子中。DNA链发生断裂：电离辐射、化学毒剂、磷酸二酯键的断裂、脱氧戊糖的破坏、碱基的损伤和脱落都是引起DNA断裂的原因。碱基损伤或糖基破坏可引起DNA双螺旋局部变性，形成酶敏感性位点，特异的核酸内切酶能识别并切割这样的部位，造成链断裂。DNA链上被损伤的碱基也可以被另一种特异的DNA-糖基化酶除去，形成无嘌呤嘧啶位点（apurinic-apyrimidinic site, AP site），或称无碱基位点（abasic site），这些位点在内切酶等的作用下可形成链断裂。DNA 的共价交联：DNA双螺旋链中的一条链上的碱基与另一条链上的碱基以共价键结合，称为DNA链间交联（DNA interstrand cross-linking）。DNA分子中同一条链中的两个碱基以共价键结合，称为DNA链内交联（DNA intrastrand cross-linking）。DNA分子还可与蛋白质以共价键结合，称为DNA-蛋白质交联（DNA protein cross-linking）。DNA损伤可导致碱基置换缺失 插入 链的断裂 肽链N-val · his · leu · thr · pro · glu · glu · · · · · · CCTC GAG基因肽链N-val · his · leu · thr · pro · val · glu · · · · · · CCAC GTG基因镰形红细胞贫血病人正常成人Hb (HbA)β亚基镰形红细胞贫血病人Hb (HbS) β亚基Ames 试验（沙门氏菌回复突变试验） 用于致癌物（或致突变物）的检测。鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型（his－）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微 镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系 统中加入哺乳动物微粒体酶，可弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。第二节DNA损伤的修复The repair of DNA damageDNA修复（DNA repair）是指纠正DNA两条单链间错配的碱基、清除DNA链上受损的碱基或糖基、恢复DNA的正常结构的过程。DNA修复是机体维持DNA结构的完整性与稳定性，保证生命延续和物种稳定的重要环节。 常见的DNA损伤修复途径 修复途径 修复对象 参与修复的酶或蛋白 光复活修复 嘧啶二聚体 光复活酶 碱基切除修复 受损的碱基 DNA糖基化酶、无嘌呤嘧啶核酸内切酶 核苷酸切除修复 嘧啶二聚体、DNA螺旋结构的改变 大肠杆菌中UvrA、UvrB、UvrC和UvrD，人XP系列蛋白XPA、XPB、XPC……XPG等 错配修复 复制或重组中的碱基配对错误 大肠杆菌中的MutH、MutL、MutS，人的MLH1、MSH2、MSH3、MSH6等 重组修复 双链断裂 RecA蛋白、Ku蛋白、DNA-PKcs、XRCC4 损伤跨越修复 大范围的损伤或复制中来不及修复的损伤 RecA蛋白、LexA蛋白、其他类型DNA聚合酶 一、有些DNA损伤可以直接修复 嘧啶二聚体的直接修复 烷基化碱基的直接修复 无嘌呤位点的直接修复 单链断裂的直接修复 嘧啶二聚体的直接修复烷基化碱基的直接修复无嘌呤位点的直接修复 DNA嘌呤插入酶能催化游离嘌呤碱基