糖酵解中间产物的鉴定试验操作步骤.docx

糖酵解中间产物的鉴定实验操作步骤 一、 实验目的 了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。 二、 实验原理 利用碘乙酸对糖酵解过程中 3- 磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使 3- 磷酸苷油醛 不再向前 变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护 3- 磷酸苷油醛是不自发分 解。然后用 2， 4- 二硝基苯肼与 3- 磷酸苷油醛在碱性条件下形成 2， 4- 二硝基苯 肼 - 丙糖的 棕色复合物，其棕色程度与 2- 磷酸苷油醛含量成正比。 三、 仪器原料和试剂 (1) 仪器：试管 (1.5 x 1.5cm )、吸量管 (1ml、、 2ml3ml )、恒温水浴、烧杯 (50ml )。 (2) 原料：新鲜酵母。 (3) 试剂 : ① 2， 4- 二硝基苯肼： 0.1g2， 4- 二硝基苯肼溶于水 100ml 2mol/L 盐酸溶液中， 贮于棕色 瓶中备用。 ② 0.56mol/L 入 NaOHS pH 硫酸肼溶液：称取 7.28g 硫酸肼溶于 50ml 水中，这时不会全部溶 解，当加 达 7.4 时则完全溶解。此液也可用于水合肼溶液配制