任务单元抗原抗体的制备.pptVIP

核酸的保存 （1）温度 -70℃ 长期保存 -20℃ 4℃（5℃）最佳和最简单 （2）介质 TE缓冲液（最常用） 第三十一页，共48页 3.脂多糖抗原的制备 第三十二页，共48页 4.Ig片段的制备 （1）非共价键解离法 肽链亚单位之间以氢键、静电引力等非共价键结合，这些键结合力较弱，可经2种方法将其断开制备片段。 ①改变pH：蛋白质解离的临界值为pH 3～4(羧基滴定范围)和pH 9～10(赖氨酸—酪氨酸滴定范围)，当加入酸或碱使pH低于，3或高于10时，肽链亚单位就会解离； ②利用强变性剂：多数蛋白在8mol／L脲或6moI儿盐酸胍中会发生变性，使肽链亚单位解离，此法也可用于载脂蛋白抗原的解离和胶原肽的提取。 第三十三页，共48页 （2）共价键解离法 二硫键是连接免疫球蛋白肽链的共价键，解离二硫键可将轻链与重链分开。解离的方法多采用氧化法和还原法。氧化法的优点是切开二硫键后，肽链不能重新形成二硫键，便于肽链纯化，缺点是蛋氨酸(甲硫氨酸)被氧化成亚砜，色氨酸侧链被破坏。 还原法目前常用，其原理是将二硫键还原成巯基，但还原的琉基极不稳定，易再重新结合成二硫键，必须及时用碘乙酸或碘代乙酰胺进行羧甲基化以封闭巯基。 第三十四页，共48页 任务单元抗原抗体的制备 第一页，共48页 主要内容 单元一 抗原的制备 单元二