利用BLI技术检测新型冠状病毒中和性抗体的方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112255420 A (43)申请公布日 2021.01.22 (21)申请号 202011531072.0 (22)申请日 2020.12.23 (71)申请人 北京百普赛斯生物科技股份有限公 司 地址 100176 北京市大兴区经济技术开发 区宏达北路8号4幢4层 (72)发明人 高文静　苗景赟　张晓慧　 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 黄爽 (51)Int.Cl. G01N 33/68 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01) G01N 21/45 (2006.01) G01B 11/06 (2006.01) 权利要求书1页 说明书5页 附图3页 (54)发明名称 利用BLI技术检测新型冠状病毒中和性抗体 的方法 (57)摘要 本发明提供一种利用BLI技术检测新型冠状 病毒中和性抗体的方法，先将同一浓度的人ACE2 蛋白捕获到生物传感器表面上，再将新型冠状病 毒棘突蛋白RBD分别与不同浓度的待测中和性抗 体预混，再将各混合液分别与捕获到生物传感器 表面上的人ACE2蛋白接触，根据基于BLI技术的 分子互作仪器检测到的干涉光谱的相对位移强 度变化计算抑制率，绘制抑制曲线，计算IC 。本 50 发明操作简单，快速高效，检测全过程无需包被 和反复加样、洗板，15min内即可得到实验结果。 检测反应在黑色孔板中进行，可实现大批量样品 A 的新冠中和抗体的检测，与传统定性检测不同， 0 通过计算IC 值，可以快速比较不同新冠中和性 2 50 4 5 抗体的抑制能力。 5 2 2 1 1 N C CN 112255420 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.利用BLI技术检测新型冠状病毒中和性抗体的方法，其特征在于，先将同一浓度的人 ACE2蛋白捕获到生物传感器表面上，再将新型冠状病毒棘突蛋白RBD分别与不同浓度的待 测中和性抗体预混，得到不同浓度的混合液，然后将各混合液分别与捕获到生物传感器表 面上的人ACE2蛋白接触，根据基于BLI技术的分子互作仪器检测到的干涉光谱的相对位移 强度变化来检测新型冠状病毒中和性抗体的抑制效率；通过计算抑制率，绘制抑制曲线，计 算IC 值，从而比较不同新冠中和性抗体的抑制能力； 50 基于BLI技术的分子互作仪器的检测参数设置如下： 运行以下程序：①Baseline 60-180s，基线步骤；②Loading  180-300s，传感器捕获人 ACE2蛋白；③Baseline2 60-180s，基线步骤；④Association  180-300s，传感器上的ACE2蛋 白结合预混的新冠棘突蛋白RBD和新冠中和性抗体，检测此步骤最终的结合信号；⑤ Dissociation 0-20s，解离步骤； 转速：1000rpm；运行温度：30℃；采集频率：Standard kinetics 5.0 Hz，averaging by  20； 人ACE2蛋白溶液的浓度为2-10μg/mL，按每孔200μL加入到分析样品阵列孔中； 将50-100nM待测中和性抗体溶液按1.5-2倍浓度梯度稀释，然后将不同浓度的待测中 和性抗体溶液分别与50nM新型冠状病毒棘突蛋白RBD溶液按等体积混合，得到不同浓度的 混合液，然后将各混合液按每孔200μL分别加入到分析样品阵列孔中。 2.根据权利要求1所述的方法