体内药物分析.pptVIP

GC中化学衍生化 RCOOH、ROH、RSH、RNH2 CH3I、CH3N2等 RCOOCH3、ROCH3、RSCH3、RNHCH3 例：烷基化 极性降低，挥发性增加 烷基化（碘庚烷、叠氮甲烷） 酰化（乙酸酐、丙酸酐） 硅烷化（三甲基氯硅烷TMCS等）。 第三十一页，共43页 第一页，共43页 体内药物分析：是指体内样品（如体液、组织、器官和排泄物等）中药物及其代谢物或内源性生物活性物质的定量分析。 药物进入体内后，其化学结构与存在状态均可能发生变化。 存在状态 游离型的药物或代谢物 结合型的药物或代谢物、结合物（缀合物） 第二页，共43页 体内样品的特点 1．样品量少、不能重复取样：体内样品采样量一般为几十微升至数毫升；多数在特定条件下采集，无法再次取样。 2．被测成分浓度低：通常在10-9～10-6g/ml，甚至10-12g/ml 。 3．干扰物质多：血样中含有蛋白质、脂肪等和大量内源性物质；以及代谢物、结合物等均可能干扰测定。 第三页，共43页 1．体内样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析。 2．对分析方法的灵敏度及专属性要求较高。在测定前需浓缩、富集以适应分析方法要求。 3．分析工作量大，数据的处理和阐明较为复杂。 体内药物分析的特点 色谱分析法：HPLC、UPLC 、GC、HPCE 灵敏度高、专属性强 免疫分析法：RIA、FIA 、EIA 灵敏度很高、专属性较强 生物学方法：体内样品中抗生素类药物的测定 体内药物测定方法 第四页，共43页 第一节 体内样品的采集与贮藏 一 体内样品的种类 二 体内样品的采集与制备 三 体内样品的贮存与处理 第五页，共43页 血液、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳汁、精液、脑脊液、泪液、胆汁、胃液、淋巴液、粪便等 尿液——主要用于药物剂量回收研究、药物肾清除率和生物利用度等研究，以及测定代谢物类型等 脑脊液——怀疑药物损伤血脑屏障 一 体内样品的种类 第六页，共43页 二 体内样品的采集与制备 （一）血样： 离心 全血 离心 上层：血清(serum) 下层：血细胞（凝块） 上层：血浆(plasma) 下层：血细胞 血液 自然凝结 加抗凝剂 采取：一般是静脉取血、针刺手指、耳垂取血 动物实验可直接从动脉或心脏采取 第七页，共43页 （二）尿液 优点：采取简便，取样量大，受试者无痛苦。 缺点：药物浓度变化也大，需采集一定时间内的尿样。 采取：动物应在代谢笼中进行，通过笼下漏斗接收。 药物可以原型（母体药物）或代谢物及其缀合物形式从尿中排出。尿中药物大多呈缀合状态，测定前要将缀合的药物游离。 第八页，共43页 （三）唾液： 优点：样品易得，取样无痛苦，尤易为儿童接收。 缺点：药物浓度变化大 采取：漱口15分钟，收集自然流出或经舌在口内搅动流出的唾液。也可采取物理、化学方法刺激使唾液流出。 制备：采取后，立即测量除去泡沫部分的体积。 分层→离心→取上清液 第九页，共43页 （四）组织： 药物动物实验、服用药物过量中毒死亡时使用组织 常用的脏器组织有：胃、肝、肾、心、、肺、脑等 制备：组织样品在测定之前，需先加入一定量水或缓冲液匀浆均匀化。 处理：沉淀蛋白、酸水解或碱水解 、酶水解（枯草菌溶素） 第十页，共43页 三、体内样品的贮存 取样后最好立即进行分析，不能立即分析的，则短期内冷藏(4℃)，长期冰冻(-20℃或-80～70℃) 。 全血未经分离，不宜直接冷冻保持。 尿液是很好的细菌生长液，若需收集24小时或更长时间的样品或不能立即测定的，应置冰箱冷藏或加防腐剂（1%甲苯、过饱和氯仿等）保存。 注意：避免将样品反复解冻-冷冻-解冻 ——冷冻前分装成若干小份贮存 （一）冷藏与冷冻 第十一页，共43页 1、终止酶的活性 ① 液氮中快速冷冻 ② 微波照射 ③ 匀浆及沉淀 ④ 加入酶活性阻断剂（氟化钠、四氢尿苷、三氯醋酸等） 2、阻止药物氧化及光解： 易被氧化药物，加抗氧剂（如维生素C） （二）去活性 第十二页，共43页 第二节 体内样品分析的前处理 药物在体内的存在形式 游离型：原形药物或代谢物 缀合物：药物或其代谢物与葡萄糖醛酸或硫酸等结合 结合物：药物与蛋白质结合 第十三页，共43页 一、体内样品前处理的目的 2、满足测定方法的灵敏度、准确度和专属性 3、改善分析环境：保护测定仪器不受体内样品中类脂和蛋白质等的污染。 1、使待测药物游离 第十四页，共43页 二、生物样品前处理方法 分离与浓集 化学衍生化 去除蛋白质 缀合物的水解 第十五页，共43页 （一）去除蛋白质 加入与水混融的有机溶剂(乙腈、甲醇、丙酮、