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皮下移植瘤实验步骤
提前2-5个工作日与细胞房人沟通好收细胞时间,收到细胞后,用锡箔纸包裹EP管。
将接种所用的细胞、注射器和记录纸等带去动物房,放进传递窗,喷酒精,照紫外线灭菌10min。
用1ml注射器吸取适量培养基与细胞轻轻吹打混匀(吸取量视所需接种体积确定)。
抓起裸鼠,于裸鼠左侧腋窝处皮下注射,接种对照组细胞,右侧接种实验组细胞,接种体积均为0.1ml。
把耳标放入打孔器中,用手抓起固定好裸鼠,用打孔器把耳标固定在裸鼠耳朵上。
称重,并登记好相应信息。
每三天称量一次裸鼠体重,成瘤后每三天用游标卡尺测量一次肿瘤长径和短径,将相应数值填写在记录纸上。
待肿瘤生长至合适大小,用CO2处死小鼠,按照实验结果摆拍裸鼠(如图)
用手术剪剪开裸鼠肿瘤周围皮肤,用组织镊小心分离肿瘤附近组织,将剥离出来的肿瘤放在垫了锡箔纸的冰上。待所有肿瘤都取下后,称重,记录数据,按照实验结果摆拍(如图)
选取其中差异大的三组,将肿瘤小心分为两部分,一部分4%PFA固定,一部分放已灭菌离心管冻存。剩余组织放已灭菌离心管冻存。(需要冻存的组织放进EP管后要插入冰盒的冰里)
将组织带回公司,需要冻存的放进-80°C,并填写《-80°C动物组织存放表》
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