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植物呼吸酶的简易测定法 植物呼吸酶的简易测定法 植物呼吸酶的简易测定法 XXX,YYY,ZZZ 一、实验目的： 1、学习植物呼吸酶的定性鉴定方法。 2、了解呼吸酶在植物呼吸代谢中的作用。 二、实验原理： 呼吸作用是由一系列酶所催化的氧化还原反应，代谢过程中有各种各样的氧化酶，根据它们氧化还原反应的特性，在加入特定底物后可以反应产生特定的颜色或实验现象从而辨别呼吸酶的存在。 三、实验材料： 土豆Solanum tuberousm L 白菜 四、实验步骤： 在无氧条件下, 脱氢酶可以用甲烯兰作为氢的受体，将其还原成甲烯白，无色。 将马铃薯切成5mm 见方的小块，分成两组，每组５块，分别放进两个试管中，各加5ml0.025%的甲烯兰溶液，其中一组煮沸10分钟，在液面上各加入１ml 液体石蜡，以阻止空气进入甲烯兰溶液中。 将试管编号放入25℃的培养箱中，一天后观察试管内溶液及马铃薯小块颜色的变化，未煮沸试管内甲烯兰溶液会变成无色。然后把试管内液面上的石蜡油吸去，取出管内的马铃薯小块放在纸上暴露于空气中再观察颜色的变化，并说明变化的原因。 要求：判断土豆中有没有脱氢酶 邻苯二酚+氧气多酚氧化酶==========邻苯二醌+水 酶的提取：取待测植物10g 剪碎放入研钵中，加蒸馏水少许研碎，再加入蒸馏水约15ml 混匀，用纱布过滤到一个小烧杯中备用。 酶促反应：取两个试管，分别加3ml 酶提取液，一个试管先煮沸数分钟，然后各加10滴 新鲜配制的1.5%邻苯二酚溶液，观察有何现象，如溶液产生褐色、红色、紫 色或兰色，则表示邻苯二酚已经被氧化，氧化程度不同，则产生不同的颜色。 要求：分别观察土豆和白菜有无多酚氧化酶。 【土豆】【白菜】3．过氧化物酶 邻苯二酚+过氧化氢过氧化物酶==========邻苯二醌+水 酶促反应：酶提取液3ml 加到两个试管中，其中一个试管先煮沸数分钟，然后各加10 滴新鲜配制的1.5%邻苯二盼溶液和3ml 3%的H2O2的溶液，如有褐色或 兰色产生，即表示过氧化物酶的存在。 要求：分别测定土豆和白菜中有无过氧化物酶。 【土豆】【白菜】实验结论：土豆、白菜中都有过氧化物酶。 4．过氧化氢酶： H2O2=========O2+H2O 取待测植物，切四块5mm 见方的小块，分为两组，其中一组煮沸10分钟，然后分别加到盛有5m13%H2O2的试管中，观察有什么变化并加以说明。 要求：测定土豆，观察有无过氧化氢酶。 ：实验结论：土豆有过氧化物酶。 1. 如果植物体含有氧化酶如何鉴定其是否含有过氧化物酶？ 答：通过颜色深浅来判断。当有过氧化物酶时，溶液的颜色更深。 通过本次实验，我学习了植物呼吸酶的定性鉴定方法，并进一步了解了呼吸酶在植物呼吸代谢中的作用，掌握了测定植物呼吸酶定性鉴定的原理操作，并且通过实验定性判定了白菜和土豆中各种酶的有无，基本上达到了本次实验的目的与要求。