第四章发酵工程制药技术(全).pptxVIP

第四章 发酵工程制药技术;概 述;微生物菌体发酵：即以获得具有药用菌体为目的发酵。 如：帮助消化的酵母菌片和具有整肠作用的乳酸菌制剂等；药用真菌，如香菇类、灵芝、金针菇、依赖虫蛹而生存的冬虫夏草菌以及与天麻共生的密环菌等药用真菌；一些具有致病能力的微生物菌体，经发酵培养，再减毒或灭活后，可以制成用于自动免疫的生物制品。 微生物酶发酵：目前许多医药用酶制剂是通过微生物发酵制得的，如用于抗癌的天冬酰胺酶和用于治疗血栓的纳豆激酶和链激酶等。 微生物代谢产物发酵：微生物在其生产和代谢的过程中，产生的各种初级代谢产物和次级代谢产物中许多是可以用于制作药物的。 如初级代谢产物：氨基酸、蛋白质、核苷酸、类脂、糖类以及维生素等；次级代谢产物：抗生素、生物碱、细菌素等。;微生物转化发酵：微生物的转化就是利用微生物细胞中的一种酶或多种酶将一种化合物转变成结构相关的另一种产物的生化反应。包括脱氢反应、氧化反应(羟基化反应)、脱水反应、缩合反应、脱羧反应、氨化反应、脱氨反应和异构化反应等，这些转化反应特异性强，反应条件温和，对环境无污染，微生物转化制药最突出的例子则是甾族化合物的转化和抗生素的生物转化等。 基因工程菌发酵：近年来，随着生物工程的发展，尤其是基因工程和细胞工程技术的发展，使得发酵制药所用的微生物菌种不仅仅局限在天然微生物的范围内，已建立起了新型的工程菌株，以生产天然菌株所不能产生或产量很低的生理活性物质，拓宽了微生物制药的研究范围。;本章主要内容： 微生物药物的分类 药源微生物及微生物药物的筛选技术 微生物药物的发酵生产技术 微生物药物的分离、精制和鉴别;微生物发酵药物的分类 (第二章内容);第一节 微生物细胞的培养概述;1、细菌 细菌是自然界中分布最广、数量最多的一类微生物。 发酵工业生产中常用的细菌有：枯草芽孢杆菌、乳酸杆菌、醋酸杆菌、棒状杆菌和短杆菌等。 主要用于生产淀粉酶、乳酸、醋酸、氨基酸和肌苷酸等。 ;工业生产常用微生物;工业生产常用微生物;工业生产常用微生物;黑曲霉;青霉;链霉???;酵母菌;大肠杆菌;枯草芽孢杆菌;第四章 4.1 微生物细胞培养概述;第四章 4.1 微生物细胞培养概述;第四章 4.1 微生物细胞培养概述;培养基主要是供给微生物生长和合成抗生素的材料。;4.1.2微生物菌种的改良、筛选与保存;1、菌种的改良 （1）从自然界中先分离出相应的菌种； （2）利用诱变筛选出符合生产要求的优良菌种； （3）利用基因工程、细胞工程的方法构建工程细胞或工程菌。;;目的——将产生菌的一些有益变异，通过不断的筛选和培育，为研究和生产提供更多合乎需要的高产优质新菌种。;1）自然选育;（1）从自然界分离获得菌株;第三次平板分离 ↓ 第三次原种斜面 ↓ 复筛（1株3-5瓶） ↓ 第四次平板分离 ↓ 第四次原种斜面 ↓ 再复筛 ↓ 较优化菌株1-3株;（2）从自发突变体中获得菌株;2）、诱变选育;诱变育种的主要环节：;出发菌株的选择;（1）诱变剂;防护面罩;各种化学诱变剂常用的剂量和处理时间;2）影响诱变效果的因素;;2、菌种的筛选：初筛-复筛;初筛方式： 固体平板发酵—— 液体振荡培养——;（1）常规的筛选方法;（2）定靶筛选;β-内酰胺酶抑制剂的筛选;高通量筛选;高通量筛选的模型： 细胞模型——观察待测样品对细胞的作用，反映药物对细胞生长等过程的综合作用。包括各种正常细胞和病理细胞。 分子模型——包括受体、酶等，药物作用的靶点明确。 其他模型;3）筛选的方法;摇瓶初筛 ↓ 挑出高产斜面 ↓ 菌种保藏（砂土管、冻干管或制备固体孢子） ↓ 摇瓶复筛（复筛次数及摇瓶数以及培养基种类根据情况决定） ↓ 挑出高产菌株 作稳定性试验和菌种特性考察 ↓ 放大试验罐、中试考察 ↓ 大型投产试验;突变株的筛选方法;影印平板（Replica plating）法是Lederberg夫妇在1952年建立;用梯度平板法定向培育若干代谢产物的高产菌株;;根据形态变异淘汰低产菌株，根据平皿反应挑取高产菌株。;;理性化筛选;降低终产物浓度;杂交育种——一般指两个不同基因型的菌株通过接合或原生质体融合，使遗传物质重新组合，再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。;（1）常规的杂交育种;（2）原生质体融合（第二节内容）;A.标记菌株的筛选;B.原生质体的制备;影响原生质体制备的因素：;C.原生质体的融合和再生;检查原生质体形成和再生的指标：;D.融合子的选择;原生质体融合与传统杂交方法相比有以下几个特点： 1、重组频率高并可能有几个亲株同时进行杂交； 2、可以进行种间甚至属间杂交并形成稳定的重组体，但重组 的频率比较低； 3、被灭活的原生质体进行融合后，仍可能活的重组体； 4、原生质体的形成与再生本身就可作为链霉菌的一种育种方 法。;4