结合新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白的核酸适配体及其用途发明专利.docxVIP

结合新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核衣壳蛋白的核酸适配体及其用途 技术领域 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种由SEQ ID NO:1-4所示的可用于结合新型冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白)(the nucleocapsid protein of SARS-CoV-2)的核酸适配体及其用途。 背景技术 冠状病毒(Coronavirus)是具有外套膜的正链单股RNA病毒，是感染人和脊椎动物的病原体，可引起多种急慢性疾病。到目前为止，能够使人类致病的冠状病毒一共有7种，包括SARS冠状病毒和MERS冠状病毒等。 2020年1月12日，世界卫生组织正式将造成肺炎疫情的新型冠状病毒命名为“2019新型冠状病毒(2019-nCoV)”，其后在2020年2月11-12 日国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses, ICTV)宣布，新型冠状病毒(2019-nCoV)的正式分类名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2， SARS-CoV-2)，世界卫生组织(WHO)同日在日内瓦举办全球研究和创新论坛上宣布，由这一病毒导致的疾病的正式名称为“COVID-19”。几种命名均表示同一种病毒引起的肺炎，以下以SARS-CoV-2作为新型冠状病毒简称。新型冠状病毒可以人传人，对比SARS冠状病毒，SARS-CoV-2 致死率低，但传播较快，SARS-CoV-2感染者会出现急性、严重呼吸道疾病，伴有发热、咳嗽、气短及呼吸困难，严重的病例还会出现肾功能衰竭和死亡，当前并无有效的治疗药物。新型冠状病毒检测方法目前也并不完善，需依赖特定仪器、特殊实验室和专业技术人员，且检测过程复杂，不能满足及时检测需求，且存在一定的漏检率。SARS-CoV-2由于潜伏期具有传染性，为了排查很多无症状感染者，迫切需要发展现场、实时、便捷的家庭检测方法。 研究发现，新型冠状病毒(SARS-CoV-2)包含4种结构蛋白，分别是核衣壳蛋白(N蛋白)、包膜蛋白(E蛋白)、膜蛋白(M蛋白)和刺突蛋白(S蛋白)。2020年1月10日前后，新型冠状病毒基因组全序列由复旦大学上海市公共卫生临床中心提交至NCBI GenBank数据库，其中28274—29533位为“N”基因，可产生病毒核衣壳蛋白(N蛋白)。参考其它冠状病毒，已知N蛋白与病毒基因组RNA相互缠绕形成病毒核衣壳，在病毒RNA的合成过程中发挥着重要的作用。同时，N蛋白相对保守，在病毒的结构蛋白中含量非常丰富，感染早期机体就能产生抗N蛋白的高水平抗体。在抗击SARS病毒中，核衣壳蛋白已被证明是良好的诊断标记，目前新型冠状病毒结构与SARS病毒类似并且新型冠状病毒引起的肺炎，相应的疫苗、小分子药物甚至抗体药物都在开发中。目前SARS-CoV-2感染肺炎的检测方法主要是实时逆转录酶聚合酶链检测方法(rRT-PCR)。不管是小分子药物、疫苗或抗体的开发周期都较长，而筛选得到的新型冠状病毒核衣壳蛋白特异的核酸适配体既可以用于快速建立有效的检测方法，也可能用于新冠肺炎的治疗。 核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX) 筛选分离得到的DNA或者RNA分子，它可以与其它靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合，因此在生化分析、环境监测、基础医学、新药合成等方面展示广阔的前景。核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程。基于核酸适配体的性质，新型冠状病毒核衣壳蛋白的核酸适配体具有结构相对稳定，简单，易于修饰以及短期内可以人工合成的优势。因此，本领域对具有针对新型冠状病毒核衣壳蛋白的结合亲和力高的核酸适配体存在需求。 发明内容 为了克服现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种具有高度特异性、分子量小、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合新型冠状病毒核衣壳蛋白的核酸适配体及其衍生物，还相应提供所述核酸适配体的用途。 为了解决上述技术问题，使用体外指数富集的配基系统进化(SELEX) 技术，筛选得到了特异性结合新型冠状病毒核衣壳蛋白的核酸适配体。具体的，本发明人设计并合成了一个随机单链DNA文库和相应的引物，用来筛选具有高度特异性、分子量小、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合新型冠状病毒核衣壳蛋白的核酸适配体，由此筛选得到一些特异性结合新型冠状病毒核衣壳蛋白的核酸适配体，并检测了它们与新型冠状病毒核衣壳蛋白的结合能力。在此基础上，本发明人完成了本发明。 在一个方面，本发明提供结合新型冠状病毒SARS-CoV-2核