基于水疱性口炎病毒载体的新型冠状病毒嵌合重组疫苗及其制备方法与应用发明专利.docxVIP

基于水疱性口炎病毒载体的新型冠状病毒嵌合重组疫苗及其制备方法与应用 技术领域 本发明属于生物技术领域，具体涉及基于水疱性口炎病毒载体的新型冠状病毒嵌合重组疫苗及其制备方法与应用。 背景技术 新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是一种新出现的β属冠状病毒。病毒基因组分析显示，该病毒与同属的SARS-CoV（Severe acute respiratory syndrome-coronavirus）非常接近（89.1%的核苷酸相似性），感染后会引起人类肺炎等症状。新型冠状病毒为单股正链RNA病毒，具有囊膜。在电镜下观察，病毒颗粒呈圆形或椭圆形，具有放射状突起。这种放射状突起是冠状病毒的特征结构，它由囊膜蛋白Spike（S）构成。S蛋白是冠状病毒的重要结构蛋白，在病毒侵入宿主细胞的过程中起着关键作用。S蛋白还是冠状病毒中和抗体的靶点，是疫苗研究的重要靶蛋白。 现已将由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引发的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)纳入《中 华人民共和国传染病防治法》规定的“乙类”传染病，并采取“甲类”传染病的预防、控制措施。 COVID-19流行病学特点如下：主要传播途径为经呼吸道飞沫传播，亦可通过接触传播；人 群普遍易感，老年人及有基础疾病者感染后病情较重，儿童及婴幼儿也有发病。基于目前的 流行病学调查，患者潜伏期一般为3-7天，最长不超过14天。临床表现多为发热、乏力、干 咳。少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。重症患者表现为呼吸困难、急性呼吸窘迫综合 征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。 由于目前尚无新型冠状病毒肺炎的特异药物，所以对患者主要开展对症治疗和支持治疗。卧床休息，保证充分热量；注意水、电解质平衡，维持内环境稳定；密切监测生命体征、指氧饱和度等。抗病毒治疗方法包括：α-干扰素雾化吸入及服用洛匹那韦/利托那韦。另外，新型冠状病毒感染的肺炎属于中医疫病范畴，病因为感受疫戾之气，可使用中医方案进行辩证治疗。 目前针对新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的疫苗和药物还处于临床试验或更早期的阶段，亟须进行全面评价和进一步优化。本申请发明人前期以水疱性口炎病毒（VesicularStomatitis Virus，VSV）为载体，将VSV病毒的糖蛋白G替换成新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的囊膜蛋白S，构建了复制型的重组病毒rVSV-SARS-CoV-2。此重组病毒表面表达新型冠状病毒囊膜蛋白S，可以模拟新冠病毒入侵细胞的过程，并能激发机体产生针对SARS-CoV-2的免疫反应，通过喷鼻免疫可以在食蟹猴体内产生高滴度的新冠病毒中和抗体，并产生针对新冠病毒的保护。近期也有两篇文献：Replication-Competent Vesicular StomatitisVirus Vaccine Vector Protects against SARS-CoV-2-Mediated Pathogenesis inMice（Cell Host Microbe. 2020 Sep 9;28(3):465-474）和A single dose ofrecombinant VSV-ΔG-spike vaccine provides protection against SARS-CoV-2challenge（bioRxiv 2020.06.18.160655）报道用VSV作为载体，表达SARS-CoV-2的囊膜蛋白S作为抗原，在小动物模型中能产生针对SARS-CoV-2的免疫反应和保护。这两篇文献使用的复制型重组病毒与本申请发明人在前期发明中构建的rVSV-SARS-CoV-2相同，其诱导的免疫反应和保护效果也相近，都仍需进一步提高。 发明内容 为了研制免疫保护效果更好的新型冠状病毒疫苗，本发明提供了基于水疱性口炎病毒载体的新型冠状病毒嵌合重组疫苗及其制备方法与应用。 第一方面，本发明保护一种重组病毒。 本发明保护的重组病毒为如下1）或2）： 1）将水疱性口炎病毒的糖蛋白G替换为嵌合囊膜蛋白S后得到的病毒；所述嵌合囊膜蛋白S为将SARS-CoV囊膜蛋白S的RBD（受体结合结构域，Receptor binding domain）替换为SARS-CoV-2囊膜蛋白S的RBD后得到的蛋白； 2）将水疱性口炎病毒的糖蛋白G替换为嵌合囊膜蛋白S后得到的病毒；所述嵌合囊膜蛋白S为将SARS-CoV囊膜蛋白S的RBD替换为SARS-CoV-2囊膜蛋白S的RBD，且将SARS-CoV囊膜蛋白S氨基酸序列的第1261-1279位删除后得到的蛋白； 所述SARS-CoV囊膜蛋白S的RBD的氨基酸序列为SARS-CoV囊膜蛋白S氨基酸序列的第315-536位； 所述SARS-CoV-2囊膜蛋白S的RBD的氨基酸序列为SARS-Co