抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S1蛋白的单链抗体及其应用发明专利.docxVIP

抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S1蛋白的单链抗体及其应用 技术领域 本发明涉及细胞免疫学、分子病毒学技术领域，尤其是涉及一种抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S1蛋白的单链抗体及其应用。 背景技术 新冠肺炎的全球传播引发了各界对抗病毒药行业的关注。在中国市场，最初是口罩、消毒剂等防护概念受到追捧。随着各界对疫情了解的深入，后续是研究各种检测试剂，疫情进行到目前阶段，各界更加关注疫苗和抗病毒药行业，抗体药的研发必将成为中长期趋势。 经过30年的发展，抗体药成为全球医药市场的重要组成部分。抗体药市场，仍由肿瘤、自身免疫两大领域主导。随着人们对疾病了解的不断加深、抗体技术的不断进化，抗体药在心血管、神经系统疾病、痛风、感染和神经系统疾病等并非传统的抗体药适应症领域也慢慢渗透。这是抗体药发展的新方向。随着技术的进步和免疫学基础研究的快速发展，抗体药的设计日益多样化，应用范围逐步扩大。 目前，新型冠状病毒在世界范围内传播，全球范围内新冠肺炎确诊病例超过5000万，死亡超过150万。针对新冠病毒的药物开发主要集中在病毒测试试剂、疫苗和中和性治疗抗体。试剂起检测作用，疫苗起预防作用，中和性抗体是实实在在起治疗作用的药物。但是到现在为止还没有正式能够应用于临床使用的抗体，大部分都还在实验阶段，小部分进入临床前研究，各个抗体的氨基酸序列不同，构建制备方法也不一样，实际应用效果也很难预判，推进不同类型的抗体研究势在必行。 国际病毒分类委员会将新型冠状病毒命名为SARS-CoV-2，世界卫生组织将感染此病毒引起的肺炎称为COVID-19。此病毒传染性强，传播途径广。该病毒能迅速适应人体环境，感染后在潜伏期即具有传播能力，同时还有一些无症状感染者报道，甚至在多种动物体内也检测到病毒核酸。这些因素使得对该病毒的防控变的非常复杂，而且目前没有有效治疗药物及疫苗上市。 SARS-CoV-2属于冠状病毒属，为单股正链RNA病毒，大小约30kb，与 SARS-CoV相似性为79％，与蝙蝠体内分离的冠状病毒(Coronavirus，CoV) 相似性最高约88％。SARS-CoV-2具有典型的冠状病毒特征，病毒包膜上有典型的棘突，形似日冕。Spike蛋白(刺突蛋白)是冠状病毒最重要的表面膜蛋白，决定了病毒的宿主范围和特异性，是宿主中和抗体的重要位点以及疫苗设计的关键靶点。 迄今为止，中和抗体已被证明是治疗病毒性疾病的有效方法。一般来说，当病毒、细菌等病原微生物入侵人体细胞时，这类抗体能够与病原微生物表面的抗原结合，把它们“中和”掉。科学研究表明，新冠病毒入侵人体细胞的“凶器”是其表面的刺突蛋白(S蛋白)，冠状病毒的结构如图1所示，这种蛋白与细胞表面受体-血管紧张素转化酶2(ACE2)结合后，新冠病毒就能入侵人体细胞，冠状病毒感染机体如图2所示。S蛋白的受体结构域(RBD)是冠状病毒表面重要的受体结合位点，所以是开发抗病毒中和抗体的重要靶点。 因此，需要开发能够抗新型冠状病毒SARS-CoV-2表面S1蛋白的具有高中和活性的抗体，以提供有效的诊断、预防和/或治疗新型冠状病毒感染的手段。 发明内容 在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子遗传学、核酸化学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。 如本文中所使用的，术语“抗体”是指，通常由两对多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ和λ轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和 CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。 VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序：FR1、CDR1、 FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4 个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗体结合部位。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)， IgA1，IgA2，IgD，IgE或