甘草酸纳米颗粒的合成及其在新型冠状病毒肺炎中的联合治疗应用发明专利.docxVIP

甘草酸纳米颗粒的合成及其在新型冠状病毒肺炎中的联合治疗应用 技术领域 本发明涉及生物技术领域，更具体的，涉及甘草酸纳米颗粒的合成及其在新型冠状病毒肺炎中的联合治疗应用。 背景技术 新型冠状病毒肺炎，简称“新冠肺炎”(COVID-19)是一种新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病。新冠肺炎大流行在世界范围内造成了广泛的发病和死亡，对全球经济和健康造成了相当大的影响。严重COVID-19患者宿主过度炎症可导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和多器官功能衰竭，导致死亡。然而，目前的管理是支持性，没有特定的药物对抗COVID-19。因此，迫切需要安全有效的治疗策略，以抑制严重急性呼吸综合征2冠状病毒(SARS-CoV-2)，同时缓解COVID-19失控的免疫应答。 纳米颗粒由于其独特的水溶性、生物相容性以及低成本、低毒性等特性，被广泛应用于医学研究，包括生物成像、生物传感、生物标记、光动力治疗和药物给药。已有研究将纳米技术实际集成到基于小分子的纳米材料中，改善原料的毒副作用，增强其功效，并通过增强通透性和保留效应(EPR效应)靶向递送药物。如银纳米颗粒和硒纳米颗粒的合成可以提高原料的生物相容性。基于角鲨烯的纳米颗粒具有较低的毒性，并能在多种小鼠模型中靶向炎症组织。基于迷迭香的纳米颗粒具有较好的水溶性和生物利用度。最近，水热法合成的甘草酸功能化量子点具有较低的毒性。 中药具有抗氧化、抗炎、抗病毒免疫调节和抗肿瘤作用，在许多疾病的治疗中显示出巨大潜力。甘草酸(GA)是中草药甘草的常见成分，已被用于治疗肝病(包括病毒性肝炎)和特殊皮肤炎症(如特应性皮炎)。同时，甘草酸已被证明对不同病毒具有活性，包括SARS相关的人和动物冠状病毒。甘草酸的抗炎和抗病毒作用，使其成为单独或与其他药物联合对抗SARS-CoV-2冠状病毒的良好候选药物。然而，由于甘草酸具有一定的细胞毒性，且在水和生物液体中溶解性差，导致其生物利用度较低，因此其治疗潜力受到了限制。 因此，为了抗COVID-19，以甘草酸的活性成分为基础，合成一种具有高生物相容性的甘草酸纳米颗粒(GANPs)，对于COVID-19的治疗具有非常重要的意义。 发明内容 本发明所要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，首先提供了一种以甘草酸为基础合成甘草酸纳米颗粒的方法。 本发明的第二个目的是提供上述方法得到的甘草酸纳米颗粒。 本发明的第三个目的是提供上述甘草酸纳米颗粒在制备COVID-19的体内外抗病毒及抗炎药物中的应用。 本发明的目的通过以下技术方案实现： 一种甘草酸纳米颗粒的合成方法，包括以下步骤： (1)将甘草酸溶液逐滴加入饱和碳酸氢钠溶液中得到混合溶液，并调整pH值9.5～10.5； (2)将混合溶液至于高压釜中150～200℃反应一段时间； (3)冷却、去除沉淀，透析、冷冻干燥即得甘草酸纳米颗粒。 优选的，上述合成方法中，步骤(3)透析使用截止分子量为14kDa的透析袋进行。 优选的，上述合成方法中，步骤(1)中甘草酸与饱和碳酸氢钠的用量比为1：3～1：5。 本发明还提供上述合成方法得到的甘草酸纳米颗粒。 本发明还提供上述甘草酸纳米颗粒在制备COVID-19的体内外抗病毒及抗炎药物中的应用。 具体的，在体外抗病毒方面，所述甘草酸纳米颗粒具有以下效果：1、降低体外细胞内/细胞上清液中病毒滴度；2、降低细胞内病毒基因mRNA的表达水平；3、体外抑制病毒增殖；4、直接灭活病毒；在体外抗炎方面，所述甘草酸纳米颗粒既能够抑制由于SARS-CoV-2引起的细胞炎性因子(例如IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-12)的表达水平；也能够降低SARS-CoV-2N蛋白刺激引起的IL-1α、IL-1β和IL-6mRNA表达水平，缓解SARS-CoV-2引起的人体细胞过度炎症反应。 具体的，在体内抗病毒方面，所述甘草酸纳米颗粒能够抑制病毒在肺内的增殖能力；缓解病毒在体内的感染，在体内抗炎性方面，所述甘草酸纳米颗粒能够减轻病毒感染小鼠的肺部炎症损伤。 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果： 本发明提供了一种通过水热法合成基于甘草酸的纳米颗粒(GANPs)的方法，并将其应用于COVID-19的抗炎及抗病毒联合作用中。该方法是通过水热法利用中草药的活性成分(甘草酸)为基础合成纳米颗粒的方法。该方法原理简单、方法快速、操作简单、成本低廉、易于普及，且合成的纳米颗粒具有改善原料甘草酸生物相容性差的作用，同时对COVID-19具有很好的抗病毒及抗炎联合治疗作用。该方法适用于缓解SARS-CoV-2引起的过度炎症反应，因此，本发明在现有基础上，为COVID-19提供了一种具有很好的抗病毒及抗炎联合治疗作用的纳米颗粒前药物。 附图说明 图1为通过水热法合成甘草酸纳米颗粒(GANPs)的原理图及其表征图； 图2是GANP