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紫外可见分光光度法实验 紫外可见分光光度法实验 1. 实验目的 1.1 了解紫外可见分光光度计的食用方法及基本结构 1.2 掌握用紫外可见分光光光度法进行定性分析和定量分析的方法 2. 实验原理 2.1 定性分析 不同物质的分子结构不同，因此各种物质各有其特征的紫外可见光吸收光谱。以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到的曲线称为吸收光谱曲线，他能清楚的描述该物质对不同波长光的吸收情况。光吸收程度最大处叫做最大吸收波长，用λmax 表示。浓度不同时，光吸收曲线的形状相同，最大吸收波长不变，只是相应的吸光度大小不同。说明吸收曲线的形状只与物质的本性有关，而与物质的浓度无关。因此，我们可以利用吸收曲线对物质进行定性分析。 2.2 定量分析 根据朗伯-比尔定律：A=εbc ，式中A —吸光度，ε—摩尔吸光系数，b —液层厚度 cm ，c —浓度，mol/L 当液层厚度b 固定时，吸光度正比于浓度，因此可采用标准曲线法对物质进行定量分析。通常选择最大吸收波长进行定量分析，以提高分析灵敏度和消除干扰影响。 3. 仪器及试剂 3.1 仪器及配件 UV1800PC 型紫外可见分光光度计，1cm 石英比色池 3.2.1 虾青素标准溶液 3.2.1.1 标准储备液（浓度为1.0mg/mL） 称取10mg 虾青素标准品溶于二甲基亚砜（DMSO ），定容至10mL ，摇匀，避光-20℃保存。 3.2.1.2 标准系列溶液的配制 用移液管分别量取0.5，1.0，2.0，3.0mL 标准储备液，分别用50mL 容量瓶定容，稀释溶剂为无水乙醇，定容之后摇匀，避光放置。 3.2.2 未知浓度的虾青素样品溶液。 4. 实验内容 4.1 不同浓度的虾青素溶液吸收曲线的比较。 4.2 标准曲线的制作。 4.3 样品溶液的测定。 5. 仪器操作步骤 5.1 开机，自检，预热20分钟 5.2 放置样品 将配好的样品转入比色池，比色池要用蒸馏水和待测溶液润洗，溶液装至比色池的1/2~2/3左右。装好后用纸巾吸干比色池表面的液体，将比色池放入样品槽中，注意比色池透光面要对住样品槽有孔的一边。 5.3 全波长扫描 将不同浓度的标准品依次转入比色池中进行全波长扫描，比较其吸收曲线和最大吸收峰 5.4 制作标准曲线 取不同浓度的标准品最大吸收波长处的吸光值绘制标曲。 5.5 样品浓度的测定 6. 注意事项 6.1 拿比色池要拿毛玻璃面，放置比色池要使毛玻璃面向下，以免影响透光面的透光性。 6.2 比色皿按材质分为几种，使用时需根据样品的性质选择不同材质的，石英比色池价格昂贵，要小心使用。 7. 实验报告内容： 3）简单操作步骤 4）实验结果（全波长扫描图、标准曲线、样品浓度的计算，定性定量依据） 5）注意事项（就自己的学习和体会写几点）