大肠杆菌感受态细胞的制备及转化.ppt

大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 制作人：李国婧 内蒙古农业大学生物化学与分子生物学实验教学中心 实验原理 实验仪器 实验试剂 实验步骤 注意事项 实验原理 电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生长前期的细胞，以使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。转化效率为109～1010 转化子/µg DNA。 热激法是利用冰冷的CaCl2处理对数生长期的细胞，可以诱导其产生短暂的“感受态”，易于摄取外源DNA。转化效率为106 ～107转化子/µg DNA。 实验仪器 1 ．超净工作台 2 ．低温离心机 3 ．恒温摇床 4 ．恒温培养箱 5 ．-70 ℃ 冰箱 6 ．制冰机 7 ．移液器 50ul 、200ul 、1000ul 实验试剂 １．氨苄（母液50mg/ml，终浓度为50ug/ml）： 2ml母液需氨苄100mg ２．CaCl2(终浓度20mM)：需贮液1M 、20ml，需 CaCl2固体4g ３．MgCl2(终浓度80mM)：需贮液1M 40ml，需 MgCl2固体4g ４．甘油：500ml 实验步骤 CaCl2感受态细胞的制备实验步骤 电转化法制备大肠杆菌感受态细胞的实验步骤 CaCl2感受态细胞的制备实验步骤 1． 前夜接种受体菌（DH5或DH1