- 1、本文档共116页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
* 5 * * * * * * * * 四 、其他小分子RNA及RNA组学 除了上述三种RNA外,细胞的不同部位存在的许多其他种类的小分子RNA,统称为非mRNA小RNA(small non-messenger RNAs, snmRNAs)。 snmRNAs snmRNAs的功能 参与hnRNA和rRNA的加工和转运。 核内小RNA;核仁小RNA;胞质小RNA;催化性小RNA;小片段干扰RNA * RNA组学研究细胞中snmRNAs的种类、结构和功能。同一生物体内不同种类的细胞、同一细胞在不同时间、不同状态下snmRNAs的表达具有时间和空间特异性。 RNA组学 * 核 酸 的 理 化 性 质 The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 第 四 节 目 录 * * 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA(或RNA) 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的应用 目 录 * 二、DNA的变性(denaturation) 定义:在某些理化因素作用下,DNA双链解开成两条单链的过程。 方法:过量酸,碱,加热,变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后其它理化性质变化: OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 目 录 * DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 * 例:变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应:DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 目 录 * 热变性 解链曲线:如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260(absorbance,A,A260代表溶液在260nm处的吸光率)值作图,所得的曲线称为解链曲线。 目 录 Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成,在这一范围内,紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度,又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 * 一般DNA的Tm值在 70-85?C之间。 DNA的Tm值与分子中 的G和C的含量有关。 G和C的含量高,Tm 值高。因而测定Tm 值,可反映DNA分子 中G, C含量。 (G+C)%=(Tm-69.3)*2.44 Tm=69.3+0.41(G+C) % * 生物化学 影响Tm值的因素 (1)溶液的性质 (2)DNA中的G-C含量 大肠杆菌DNA在不同浓度KCl溶液下 的熔点温度曲线 (3) DNA均一性 均一性高,熔解过程发生在很小的温度范围 * 三、DNA的复性与分子杂交 DNA复性(renaturation)的定义 在适当条件下,变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性。 减色效应 DNA复性时,其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性,这一过程称为退火(annealing) 。 目 录 * 在DNA变性后的复性过程中,如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中,只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系,在适宜的条件(温度及离子强度)下,就可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成,也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 核酸分子杂交(hybridization) * * * 生物化学 ?一系列性质将得到恢复,但是生物活性一般只能得到部分 的恢复。 ?DNA复性主要受三种因素的制约: ?1)将热变性的DNA骤然冷却至低温时,DNA不可能复性。 ?但是将变性的DNA缓慢冷却时(比Tm低25 ℃左右最 佳),可以复性。 ?2)DNA浓度较高时,两条互补链彼此相碰的机会增加, 易于复性。重复片段越多,复性越快。 ?3)DNA片段的大小:DNA片段越大,复性越慢 * 生物化学 ? 复性速度可用Cot1/2来衡量。 ? Co为变性DNA复性时的初始浓度,以mol·L-1,t 为时间,以秒表示。 Cot1/2的单位是mol·L-1.S ? Cot1/2表示复性一半的Cot值,与速率成反比, Cot1/2增大意味着反应速度变慢。 * 核酸杂交可以在液相或固相上进行。目前实验室中应用最广的是英国分子生物学家E.M.southern所发明的印迹法,称Southern印迹法(Southern blo
文档评论(0)