用分光光度计测dnarna的浓度.pdfVIP

用分光光度计测定质粒 DNA的浓度 一、目的 熟练掌握分光光度法检测 DNA纯度和浓度的方法。 二、原理 DNA或 RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸 收，其吸收峰在 260nm处。 波长为 260nm时，DNA或 RNA的光密度 OD260不仅与总含量有关，也随构型而有 差异。对标准样品来说，浓度为 1 μg / ml 时， DNA钠盐的 OD260＝当 OD260＝1 时， dsDNA浓度约为 50 μg / ml ssDNA浓度约为 37 μg / ml RNA浓度约为 40 μg / ml 寡核苷酸浓度约为 30 μg / ml （youyu 底物不同有差异） 当 DNA样品中含有蛋白质、 酚或其他小分子污染物时， 会影响 DNA吸光度的准确 测定。一般情况下同时检测同一样品的 OD260、OD280和 OD230，计算其比值来 衡量样品的纯度。 经验值： 纯 DNA：OD260/OD280≈( ＞ , 表明有 RNA污染；＜ 1。6，表明有蛋白质、酚等污 染）