二-动物细胞工程PPT课件.ppt

6.如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？ 体外培养单个Ｂ淋巴细胞，提取分泌的抗体 7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?怎样解决这个问题？ 5.这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 产量低，纯度低，特异性差 单克隆抗体： 　　 杂交瘤细胞经无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 　　 特点：特异性强、灵敏度高 概括单克隆抗体的概念 单：单个细胞 克隆:无性繁殖 抗体:化学性质单一、特异性强 技术原理： 4）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 （获取大量单克隆抗体） 1）单个B淋巴细胞产生单一抗体 （但不能无限增殖） 2）肿瘤细胞能无限增殖 （但不能分泌单一抗体） 3）细胞融合技术杂交瘤细胞 （既无限增殖又分泌单一抗体） 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 1975年科学家米尔斯坦(阿根廷）和柯勒（德国）的实验 单克隆抗体的制备 抗原注入小鼠体内 骨髓瘤细胞 分离 B淋巴细胞 细胞融合 杂交瘤细胞 细胞培养 选择培养细胞 注入小鼠 体内培养 培养基 体外培养 从腹水提取 从培养液提取 单克隆抗体 能产生抗体 能无限增殖 既能产生抗体又能无限增殖 单克隆抗体的制备 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 融合 骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 选择培养基上培养 专一抗体检验阳性 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 克隆杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞 单克隆抗体制备过程示意图 多种杂交细胞 ①为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？ ② 会有几种融合方式？ ③ 杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？ ④ 是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？ ⑤ 如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？ BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 √ 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。 整个制备过程为何要经过两次筛选? 第一次筛选：用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞 第二次筛选（克隆化培养和抗体检测）：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 单克隆抗体的制备——体外培养法，动物体内诱生法？ 小鼠腹腔内有自然吞噬作用，避免污染；小鼠腹腔本身为杂交瘤的良好培养环境，使杂交瘤细胞始终处于对数生长状态。 体外培养法——大规模生产 体内培养法——小规模生产 二 动物细胞工程 动物细胞工程 其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 胚胎移植 核移植 烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 思考？ 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得人造皮肤后再移植 （一）、概念 是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 （二）、原理 细胞分裂增殖 一、动物细胞培养 (三)、动物细胞培养过程（示意图） 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 剪碎组织的目的？ 胰蛋白酶处理的目的？ （四）动物细胞生长特性 细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求：培养瓶或培养 皿的内表面光滑 无毒、易于贴附。 接触抑制 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞，这个过程称为原代培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。（分瓶培养的过程） 3.培养过程： 动物胚胎或幼龄动物的细胞、组织或器官 细胞悬浮液 →原代培养 （遗传物质不变）