大肠杆菌实验总结.pdfVIP

分离 灭菌 LB 液体和固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌 ↓ 倒平板 将固体培养基倒入 4 个灭菌后的培养皿中，制备平面培养基 ↓ 在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养 12h 培养 ↓ 平板划线法 划线分离 培养皿倒置， 37℃恒温培养 12~24 小时 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。 （一）制备 LB培养基（通用的细菌培养基） 1、配方：蛋白胨 10.0 克，牛肉膏 5.0g ，氯化钠 10.0 克，水 1000ml （配固体培养基再加琼脂 20 克） 2、流程 计算称量 溶解 调 pH 分装 加塞，包扎 灭菌 倒平板 培养基配制 (特 ) 培养基应现配现用，每次配置 350ml ，一次性使用完毕。 1、 按下表称取物资配置 LB 培养基到 500ml 锥形瓶中： 例如：配制 350mlLB 培养基配方如下： [ 配置双份 ] 蛋白胨 酵母提取物 氯化 成分名称 TRYPTON YEAST 去离子水 钠 E XTRACT 称取质量 3.5g 3.5g 1.75g 补足 350ml 2、 用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、完全、 溶解。待灭菌。 ①分装 ：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用 ___三角漏斗 _。 ②加塞 ：试管用塑料盖或 __棉花塞 ___ ；三角瓶口用 _封口膜 __或_ 6 层纱布封口 ,再用 __牛皮纸 __ 或报纸 封口 。 ③包扎： 用_牛皮纸 __或报纸 ④灭菌：高压蒸气灭菌法 1）加水： 向外层锅内加入适量的水，加水的要求是 不触及内胆 _. ）装锅：2 物品放置的要求 __整齐、稳定、留出空隙 ：加盖：将盖上的 排气软管 插入内层灭菌桶的 _排气槽 __ 内。再以 __两两对称 方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺 栓松紧一致，勿使漏气。 3 ）加热排气： 打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的 冷空气 。待冷空气 完全排尽 后，关上排气阀。 4）保温保压： 当锅内压力升到 1_kg/cm 2 时，控制热源，维持压力至 15 _min 。 5）出锅： 切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至 _0_ 时， 打开 _排气阀 __，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 否则会因锅内压力较高，打开气阀后 造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。 灭菌后，通常将实验用具放入 60℃~80 ℃_烘箱 中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起 _污染 _ 。 ⑤倒平板、制斜面 操作平台 ：超净台 灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开 __紫外线 _和_过滤风， 灭菌 30min. 倒平板：待培养基冷却至 __60_