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江苏金丝利药业有限公司
操作规程
题 目 大肠杆菌宿主菌蛋白质残留量检验标准操作规程
编 号 QC-OS-026-06 复 印 号
制 定 人 审 核 人 批 准 人
制定日期 审核日期 批准日期
颁发部门 质检部 生效日期
分发部门（岗位） ：档案室、生产部、 修订原因及目的：对配液及具体操作
质检部、理化检测 2 进行细化完善。
标题：进一步加强注射用重组人白介素 -2 原液大肠杆菌宿主菌蛋白质残
留量的控制。
范围： 注射用重组人白介素 -2 原液大肠杆菌宿主菌蛋白质残留量的检
测。
责任人： 质检部经理、理化检测人员
正文：
一 制订依据： 《中国药典》2010 年版三部 。
简述：利用酶联免疫法测定大肠杆菌表达系统生产的重组制品中菌体蛋
白质残留量，具体如下：将兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体包被， 结合菌体蛋白，
再和有辣根过氧化酶标记的兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体结合，加入底物，产
生的物质在 492nm 处测吸光度， 与参考品的标准曲线对照， 即可得原液中菌
体蛋白的含量。
二 规程：
1 仪器与用具
1.1 CS-9301PC 型酶标仪 日本岛津制作所。
1.2 Multiskan FC 酶标仪 美国 Thermo Scientific
1.3 96 孔细胞培养板。
1.4 37℃恒温培养箱。
1.5 BCD-180WD 型冰箱 上菱冰箱厂。
1.6 移液枪 美国 Thermo Scientific 。
2 试药与试液
2.1 实验材料 所需化学试剂均应为分析纯。
2.2 包被液（ pH9.6 碳酸盐缓冲液） 称取碳酸钠 0.32g，碳酸氢钠
编号： QC-OS-026-06 页号： 2/4
江苏金丝利药业有限公司
操作规程
0.586g，置 200ml 量瓶中加水溶解并稀释至刻度。 4℃冷藏保存。
2.3 磷酸盐缓冲液 (pH7.4) 称取氯化钠 8g、氯化钾 0.2g、磷酸氢二
钠 1.44g （相当于Na HPO ·12H O 3.63g，Na HPO ·12H O 中磷酸氢二钠
2 4 2 2 4 2
所占百分比为 39.7%）、磷酸二氢钾 0.24g，加水溶解稀释至 500ml，121℃
灭菌 15 分钟。
2.4 洗涤液（ pH7.4） 取聚山梨酯 20 0.5ml ，加磷酸盐缓冲液至 500
ml ，4℃冰箱保存。
2.5 稀释液（ pH7.4） 称取牛血清白蛋白 0.5g，加洗涤液溶解并稀
释至 100 ml，4 ℃冰箱保存。
2.6 浓稀释液 称取牛血清白蛋白 1.
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