化学发光成像系统及其实用技术.pptVIP

临床检验诊断学教育部重点实验室 刘北忠 教授;复习化学发光的基本知识 化学发光成像系统的应用 化学发光成像系统的发展 化学发光成像系统的结构 化学发光成像系统的操作 化学发光成像系统的注意事项 Western Blot常见问题分析 ;化学发光（CL）是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。 一个化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件： 第一：反应必须提供足够的能量 （170～300 KJ/mol） 第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的荧光量子产率。;依据供能反应的特点，可将化学发光分析法分为： 1 ）普通化学发光分析法 (供能反应为一般化学反应 )； 2 ）生物化学发光分析法 (供能反应为生物化学反应；简称 BCL)； 3 ）电致化学发光分析法 (供能反应为电化学反应，简称 ECL)等。;1 ．鲁米诺及其衍生物 2 ．光泽精 3 ．洛粉碱 4 ．过氧化草酸酯类 5 ．吖啶酯类;灵敏：化学发光免疫分析方法的检测灵敏度要远远高于ELISA、荧光免疫等，而优于或与同位素检测相当； 方便：在使用方便性上，化学发光与传统ELISA方法一样简单易用； 安全：在对人体和环境的危害上，化学发光对此没有任何担忧。;无机化合物化学发光分析 有机化合物的化学发光分析 化学化光在生物领域的应用 ;金属离子分析 其它无机化合物的分析 ;有机酸 有机碱 氨基酸 糖类 类固醇与类酯 药物 ;高灵敏度使得它非常适合于微小化的生物分析装置，以用于小量样品体积的基因和蛋白的高通量筛选。 体外和体内连续检测生物过程，可应用于临床、诊断、和药物开发等。 结合发光酶或某些在基因水平有生物特异结合位点的发光蛋白发展了超敏感和选择性的生物分析工具。;液相样品的检测化学发光分析仪 固相样品的检测化学发光成像仪;采用电化学发光免疫技术，被特殊标记物标记的抗体（抗原）与待检测抗原（抗体）结合后，与参与反应物在电极上发生一系列的反应并释放出光子后，通过光电倍增管检测光信号，并通过计算机的计算分析，得出结果;新的BL/CL生物技术工具 向微型化、自动化的方向发展 ;1、免疫检测 化学发光已经???泛的应用到免疫检测中进行标记物的超灵敏检测。 CL免疫检测不但可以通过以CL分子直接标记抗原或抗体，也可以以CL底物标记可被检测的酶。 ;2、基因表达 体内基因表达模式方面的研究。 在药物研发领域，科学家通过可发光转基因动物（例如：大鼠或小鼠基因组中整合了修饰的内源基因和BCL报告基因）作为人类疾病的模式动物进行目标确认的研究。 ;3、组织切片和单细胞 原位CL(化学发光)杂交检测方法是基于标记的寡核苷酸探针与目标核酸序列特异性原位杂交，再进行CL检测。这种方法不但可以定位还可以定量检测在细胞或组织中目标序列的数量。 ;4、离体器官灌流 　　 作为一种简单而可靠的模式，分离并灌注器官被广泛的应用在各种生物学功能的研究方面。BL/CL成像已经被应用到病生理过程的 ex vivo研究中。 ;5、动物体内监测 BL/CL反应所产生的可见光可以部分的透过动物组织，因此可以在整体动物的模式下进行成像。;6、肿瘤研究 研究肿瘤的生长与转移，可以通过活体中注射BL重组肿瘤细胞，再成像进行监测。 另一种方式，初期的肿瘤和不确定的转移可以通过使用基因工程的发光细胞作为探针进行定位。 ;7、细胞移植 　　 心脏细胞移植中胚胎心脏成肌细胞的位置、数量和存活时间可以在活体动物中进行非侵入行的监测。 体内BL成像同样提供了一种新的可以动态检测移植的人造血干细胞的方法。 ;8、传染性疾病 疾病的进程和治疗剂的功效可以通过对小鼠注射BL标记进行评估。 例如注射经过修饰的病原微生物，然后对透过动物组织的光进行成像。 ;9、其他 其他的生物学过程同样可以通过BL标记后活体成像进行研究，比如细胞凋亡、蛋白-蛋白互作和效应细胞功能等等。 ;感光胶片 冷CCD;感光胶片－－它已经被认为是对固定在膜上的蛋白或核酸进行化学发光检测的强有力的工具，如Southern、Northern和Western杂交的化学发光检测。;环境要求高 操作要求严 时间较长;弱光成像设备是基于超高灵敏度的CCD相机可以检测到由样品表面发生特定的反应后发射出来的光。 这些设备不但可以在单分子水平定量发光的强弱，还可以进行定位。;CCD成像技术：基于CCD的影像系统已成为化学发光印迹结果获得和记录的好工具。这些系统在信号测试的动态范围上表现出很好的效果。 环境要求低 操作要求简单 摄像时间短，并且可以获得多个影像和容易存储 灵敏度高，CCD的量度大小为3－4个级数，而X－