医学分子生物学实验技术.pdfVIP

1、基因：是遗传的物质基础，是 DNA 或者 RNA分子中携带遗传信 息的特定核苷酸序列。 2、基因组： 是指单倍体细胞核、细胞器或病毒粒子所含的全部 DNA 或 RNA 分子，每个生物的基因组携带者构成和维持该生物体生物形 式所必需的所有生物信息。 3、逆转录： 以 RNA为模板，由反转录酶催化四种 dNTP 聚合，产生 DNA 的过程。 4、聚合酶链反应： 是一种由引物介导利用 DNA 聚合酶在体外扩增目 的基因的方法，也叫基因扩增技术。 5、限制性核酸内切酶： 是一类能识别双链 DNA 分子中的某些特定核 苷酸序列，并由此切割 DNA双链的核酸内切酶。 6 引物：是一种与 DNA模板链互补的线性核苷酸变短， 其 3 ’末端为游 离的 -OH，细胞内复制所需的引物是一小段 RNA。催化游离 dNTP 之 间相互聚合。 7、TaqDNA聚合酶： 从一种嗜热菌株中分离得到的耐热的 DNA 聚合 酶。 8、退火 : 热变性的 DNA 经缓慢冷却后即可复性， 这一过程成为退火。 9、启动子： 是位于转录起始点附近，且为转录所必需的序列元件。 10、DNA 变性： 当 DNA 收到某些理化因素作用时， DNA双链互补碱 基对之间的氢键和相邻碱基之间的堆积力受到破坏， DNA分子被解开 成单链，逐步形成为无规则线团的构象， 不涉及核苷酸间共价键的断 裂。 1、RT-PCR的基本原理 将 RNA反转录与 PCR过程结合的一种 PCR技术，在反转录酶的 作用下，以 mRNA为模板，反转录生成 DNA，再以 cDNA 为模板进行 PCR扩增。 2、DNA 电泳的基本原理，按照支持物不同可以分为几类 基本原理： 核酸是两性电解质，在中性或偏碱性的 pH 溶液中均 带负电，在电场中向正极泳动，不同的核酸在相对分子质量、分子形 状等方面各有不同， 在凝胶的空隙中泳动时电泳迁移率各不相同， 因 此借助电泳即可使其得到分离。 分类： 1 琼脂糖凝胶电泳 AGE 2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PAGE 3 毛细管电泳 3、总 RNA提取后，如何鉴定 RNA 的纯度 （1）紫外分光光度法：先通过 A260 与 A280 的比值判断核算的纯度， 纯 RNA的 A260 与 A280 的比值等于 2.0，比值升高或降低均表示样品 不纯。 (2)琼脂糖凝胶电泳法： 基因组 DNA 的分子量远远大于 RNA，两者之 间电泳迁移率存在很大差别，用荧光染料 EB为示踪剂的 AGE 即可观 察到 RNA分子中是否含有 DNA，细胞 RNA 的琼脂糖凝胶电泳一般可 见三条条带，条带模糊比例不合适及弥散明显说明 RNA有严重降解。 4、PCR的基本原理和基本步骤，知道几种 PCR （1）基本原理 是以待扩增的 DNA 分子为模板，以一对人工合成的、 分别与模板的 5 ’端和 3 ’端互补的单链寡核苷酸作为引物， 在耐热 DNA 聚合酶