溶血率实验方案.docVIP

溶血率测定实验方案 1. 实验目的 考察 XXXX 是否具有溶血反应。 2. 实验原理 当稀释血液中加入溶血剂后，红细胞溶解并释放出血红蛋白（ Hb）,血红蛋 白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定波长（ 530〜 550nm）下比色，吸光度变化与稀释液中 Hb含量成正比，最终显示 Hb浓度。 溶血剂配方不同， 所形成血红蛋白衍生物不同， 吸收光谱不同， 一般最大吸收峰 接近 540nm。 3. 实验材料 3.1 受试品 受试品 XXXXX 由本公司自制，受试品储备液浓度为 XXX mg/mL 。 3.2 实验动物 SD大鼠，体重200^20 g,雌雄各半，上海斯莱克实验动物有限责任公司提 供，许可证 : XXX 3.3 实验仪器及试剂 试剂：磷酸盐缓冲液（ PBS）， XXX 公司提供； Triton X-100（2%， w/v），， XXX 公司提供。 仪器：离心机 : 北京医用离心机厂，型号 :XXX, 恒温水浴锅 : 上海跃进医疗器 械厂，型号： XXXX 。 4. 实验方法 1.2%红细胞悬液的制备 取新鲜大鼠血〜10 mL，1000〜1500r/min离心10 min，除去上清液，沉淀的红细胞再用 PBS按上述方法洗涤3次，至上清液不显 红色为止。将所得红细胞用 PBS配成2%的混悬液（红细胞2mL，加生理盐水至 100mL），供试验用。 2. 实验分为 4组，每组取 5个离心管，每组各管分别加入材料 A 0.9 mL （实 验组A）、材料B 0.9 mL （实验组B））同批号PBS 0.9 mL（阴性对照组）和Triton X-100 （2%，w/v） 0.9 mL （阳性对照组、。每管加稀释兔血0.1 mL，轻轻混匀 后置37C水浴孵育1 h, 1000r/min离心5 min，吸取上清移至96孔板，用酶标 仪在波长545 nm处测吸光度（A ）值，取平均值计算溶血率。 溶血率: 溶血率（%）= （实验组 A 值－阴性对照组 A 值）/ （阳性对照组 A 值 —阴性对照组A值）X 100%。 预实验：正式实验之前用紫外分光光度计测定溶血后形成的血红蛋白衍生 的最大吸收波长。 5 数据处理 6 实验结果 7 结论