基因操作的基本步骤.pptVIP

基因操作的基本步骤;从细胞中分离出DNA;;基因操作“四部曲”——即四个基础步骤: ;步骤一: 提取目基因;目基因提取方法;1 . 鸟枪法（散弹射击法） 用限制酶将供体细胞中DNA切成很多片段, 将这些片段分别载入运载体, 然后经过运载体分别转入不一样受体细胞, 让供体细胞提供外源DNA全部片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增）, 从中找出含有目基因细胞, 再利用一定发方法将目基因DNA片段分离出来。;（2）基因文库建立方法;1）反转录法: 以目基因转录成信使RNA为模板, 反转录成互补单链DNA, 然后在酶作用下合成双链DNA, 从而取得所需基因。;2）依据已知氨基酸序列合成DNA法 : ;上述三种目基因提取方法有何优缺点？;哪些新技术能大大简化基因工程操作技术？;;步骤二: 目基因与运载体结合;;常见受体细胞: ;①直接导入法有电击、显微注射、直接吸收、基因枪等方法。 （1）电击法: 借助电击仪高压脉冲把目基因打入宿主细胞。 （2）显微注射法: 利用微量注射器在显微镜下直接把目基因注入宿主细胞。 （3）直接吸收法: 把目基因和宿主细胞混在一起, 让其吸收。 （4）基因枪法: 在金属微粒上涂一层目基因, 然后发射到宿主细胞中。 ②间接导入法常见载体是质粒、λ噬菌体、科斯质粒。 （1）质粒是细菌染色体DNA以外环状双链DNA分子, 它能自我复制, 也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表示。质粒通常还含有标识基因, 这能够从细胞表型特征来识别。 （2）λ噬菌体是一个细菌病毒, 其环状双链DNA能够作为目基因载体。 （3）科斯质粒是一个杂种质粒, 含有质粒和λ噬菌体部分次序, 很适适用作真核生物基因载体。;1.将目基因导入植物细胞;2.将目基因导入动物细胞; 1）将细菌用CaCl2处理, 以增大细菌细胞壁通透性。 2）使含有目基因重组质粒进入受体细胞。 3）目基因在受体细胞内, 随其繁殖而复制, 因为细菌繁殖速度非常快, 在很短时间内就能取得大量目基因。;步骤四: 目基因检测和表示; 不能, 受体细胞必需表现出特定性状, 才能说明目基因完成了表示。;　　多细胞生物检测, 将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体, 检测这些个体是否摄入目基因, 摄入基因是否表示（是否表现出对应性状）。淘汰无改变个体, 保留有对应改变个体深入培养、研究。;;1）以下说法正确是 （ ） A、全部限制酶只能识别一个特定核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一运载体 C、运载体必需含有条件之一是: 含有多个限制酶切点, 方便与外源基因连接 D、基因控制性状都能在后代表现出来;2）不属于质粒被选为基因运载体理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、含有标识基因 D、它是环状DNA;3）相关基因工程叙述中, 错误是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目基因取得 C、目基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目基因不用限制性内切酶;4）相关基因工程叙述正确是 （ ） A、限制酶只在取得目基因时才用 B、重组质粒形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质结构可为合成目基因提供资料;5）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工。在基因操作基础步骤中, 不进行碱基互补配对步骤是 （ ） A、人工合成目基因 B、目基因与运载体结合 C、将目基因导入受体细胞 D、目基因检测和表示;